[发明专利]鸡白痢抗体乳胶凝集负筛选检测试剂盒及制备方法和应用

权利要求书

1.一种鸡白痢沙门氏菌抗体乳胶凝集负筛选检测试剂盒，其特征在于，包括沙门氏菌表面抗原InvJ重组蛋白致敏乳胶试剂和分泌蛋白SopA C端重组蛋白致敏乳胶试剂，所述的InvJ重组蛋白致敏乳胶试剂是由水溶性碳二亚胺将原核表达和纯化后的沙门氏菌表面抗原InvJ重组蛋白共价偶联到羧化乳胶颗粒的表面而得，所述的SopA C端重组蛋白致敏乳胶试剂是由水溶性碳二亚胺将原核表达和纯化后的沙门氏菌分泌蛋白SopA C端重组蛋白共价偶联到羧化乳胶颗粒的表面而得。

2.根据权利要求1所述的鸡白痢沙门氏菌抗体乳胶凝集负筛选检测试剂盒，其特征在于，所述的沙门氏菌表面抗原InvJ重组蛋白致敏乳胶试剂由下述方法制成：

A、将1 mL 10 wt%的乳胶原液分别用碳酸盐缓冲液和磷酸盐缓冲液离心洗涤后，用0.625mL 0.01M磷酸缓冲盐溶液重悬羧化乳胶；

B、加入0.625 mL 2 wt %的水溶性碳二亚胺，37℃水平摇动3 h，离心弃上清，用0.01M硼酸盐缓冲液洗涤沉淀后将羧化乳胶重悬至1 wt%；

C、在步骤B所述的羧化乳胶溶液中加入等体积 0.1125mg/mL的重组InvJ/His-tag融合蛋白溶液进行偶联，37℃水平摇动6 h；

D、偶联结束后用 0.1M 甘氨酸0.05 mL室温缓慢终止30 min；离心，沉淀用1 mL1 wt %的BSA溶液封闭后，悬浮于0.5 mL储存液中保存，所述的储存液含0.01M磷酸盐缓冲液、5wt%甘油、0.01 wt%牛血清白蛋白、0.1 wt%叠氮钠，制得InvJ重组蛋白致敏乳胶试剂。

3.根据权利要求1所述的鸡白痢沙门氏菌抗体乳胶凝集负筛选检测试剂盒，其特征在于，所述的沙门氏菌分泌蛋白SopA C端重组蛋白致敏乳胶试剂由下述方法制成：

（1）将1 mL 10 wt %的乳胶原液分别用碳酸盐缓冲液和磷酸盐缓冲液离心洗涤后，用0.625mL 0.01M磷酸缓冲盐溶液重悬羧化乳胶；

（2）加入0.625 mL 2 wt %的水溶性碳二亚胺，37℃水平摇动3 h，离心弃上清，用0.01M硼酸盐缓冲液洗涤沉淀后将羧化乳胶重悬至1 wt%；

（3）在步骤（2）所述的羧化乳胶溶液中加入等体积的0.225mg/mL的重组SopA-C/His-tag融合蛋白溶液进行偶联，37℃水平水平摇动6 h；

（4）偶联结束后用0.05 mL 0.1M 甘氨酸室温缓慢终止30 min；离心，沉淀用1 mL1 wt%的BSA溶液封闭后，悬浮于0.5 mL储存液中保存，所述的储存液含0.01M磷酸盐缓冲液、5wt%甘油、0.01 wt%牛血清白蛋白、0.1 wt%叠氮钠，制得SopA C端重组蛋白致敏乳胶试剂。

4.权利要求1所述的鸡白痢沙门氏菌抗体乳胶凝集负筛选检测试剂盒在检测鸡白痢沙门氏菌感染抗体中的应用。