[发明专利]基于二甲基化多重标记及特征碎片离子的绝对定量方法

权利要求书

1.基于二甲基化多重标记及特征碎片离子的绝对定量方法，其特征在于：

对1份以上的待测蛋白和/或肽段样品及已知量目标内标物中的蛋白和/或肽段分别采用不同的二甲基化试剂进行分别标记，标记所用不同二甲基化试剂分别为下述中的2个及以上：

1-plex：CH₂O+NaBH₃CN；2-plex：¹³CH₂O+NaBH₃CN；

3-plex：CH₂O+NaBD₃CN；4-plex：¹³CH₂O+NaBD₃CN；

5-plex：CD₂O+NaBH₃CN；6-plex：¹³CD₂O+NaBH₃CN；

7-plex：CD₂O+NaBD₃CN；8-plex：¹³CD₂O+NaBD₃CN;

即可得到物理化学性质相同而相对分子量不同的一组同位素标记的蛋白和/或肽段，再将所得的蛋白和/或肽段混合进行质谱检测，能够实现最高7个待测样品的同时定量分析；利用液质联用系统进行质谱数据采集，提取样品和内标物的二级谱中相应的具有同位素标记的a、b、y特征碎片离子强度或者自身强度增强的a1离子强度，比较同一肽段不同标记的峰面积，由内标物中已知量目标蛋白和/或肽段的绝对量得到样品中目标蛋白和/或肽段的绝对定量，进而实现多样品多靶标的高通量目标蛋白或肽段的绝对定量;多重定量方法适用于多样品分析或基于标准曲线的目标物分析中的一者，或者二者组合使用，多样品分析即为利用一重标记方法标记已知量目标内标物，其余2-7重标记分别标记2-7个待测样品；基于标准曲线的目标物绝对定量即为利用2-7重标记分别标记所有目标内标物的2-7个已知浓度梯度，生成MS 分析的标准曲线，用其余一重标记方法标记待测样品。

2.按照权利要求1所述的绝对定量方法，其特征在于：质谱采集模式可选用多反应监测MRM或平行反应监测PRM，根据实际测量样品的复杂程度及所选择多重标记通量选择常用的多反应监测MRM或平行反应监测PRM中的至少一种。

3.按照权利要求1所述的定量方法，其特征在于：待测样品为含有蛋白质和/或肽段待测物的样品，包括细胞、生物组织、生物体液、微生物、食品、生物环境污染物或动物排泄物；含有蛋白质和/或肽段待测物的样品需经过蛋白酶酶切，所用蛋白酶为适用于待测物的样品中所有酶切位点的蛋白酶中的一种或二种以上。

4.按照权利要求1所述的定量方法，其特征在于：定量方法适用于目标蛋白质的绝对定量或目标肽段的绝对定量，所述目标肽段包含具有翻译后修饰的肽段。

5.按照权利要求1所述的定量方法，其特征在于：定量方法适用于包括两重、三重、四重、五重、六重或七重待测样品的同时定量分析，也适用于基于标准曲线的多样品同时定量分析。

6.按照权利要求1所述的定量方法，其特征在于：所述的液质联用系统中的质谱仪包括静电场轨道阱Orbitrap、飞行时间管TOF、三重四级杆QQQ或傅立叶变换离子回旋共振质量分析器FT-ICR。