[发明专利]活细胞传感仪在植物细胞低温保藏中的应用

权利要求书

1.一种提高冷冻保存细胞的细胞活力的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)用0.15～0.3M蔗糖作为预处理剂对处于对数生长期的植物细胞进行预处理；所述的植物细胞是罗汉果悬浮细胞，进行预处理的时间为8～22小时；

(2)将细胞加入到含有冷冻保护剂的培养基中，进行低温保存；所述的冷冻保护剂为DMSO和蔗糖，在培养基中的终浓度为：

DMSO：8～12％(w/v)；

蔗糖：8～12％(w/v)。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，还包括：对预处理后的细胞测定并记录电容值A₁；

步骤(2)中，冷冻保存后，还包括：对植物细胞进行细胞复苏，利用活细胞传感仪测定并记录电容值A₂；

以细胞的基础电容值为A₃；以式(I)获得细胞活力保存率：

细胞活力保存率＝(A₂-A₁)/(A₃-A₁) (I)；

根据获得的细胞活力保存率，评价植物细胞的细胞活力。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的植物细胞罗汉果愈伤组织的悬浮细胞。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的蔗糖存在于液体培养基中，将处于对数生长期的植物细胞加入到液体培养基中，进行预处理。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，以蔗糖作为预处理剂时，所述的蔗糖的浓度为0.18～0.22M。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，以蔗糖作为预处理剂时，所述的蔗糖的浓度为0.2M。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，进行预处理的时间为8-10小时；预处理的温度为25±2℃；预处理的转速为：110±20rpm。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)后，还包括：分离经过预处理的细胞。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，通过离心分离预处理的细胞。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，将细胞加入到含有冷冻保护剂的培养基中后，进行低温保存的步骤包括：

(i)细胞孵育：在0～4℃，110±20rpm条件下孵育45±10min；

(ii)先在-20±2℃下保存40±10min，再放到-80℃±10℃保存。

11.一种快速评价冷冻保存的罗汉果悬浮细胞的细胞活力的方法，其特征在于，所述方法包括：

(a)按照权利要求1的方法将植物细胞进行冷冻保存；冷冻保存前测定并记录电容值A₁；

(b)冷冻保存后，对植物细胞进行细胞复苏，利用活细胞传感仪测定并记录电容值A₂；

(c)以细胞的基础电容值为A₃；以式(I)获得细胞活力保存率：

细胞活力保存率＝(A₂-A₁)/(A₃-A₁) (I)；

(d)根据(c)获得的细胞活力保存率，评价植物细胞的细胞活力。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，细胞活力保存率越高，则细胞活力越好。