[发明专利]法尼醇X受体的新配体及其筛选方法和应用

说明书

本发明涉及一种法尼醇X受体的新配体及其筛选方法和应用。本发明首次利用核磁共振检测，通过记录、分析饱和传递差异和WaterLOGSY两种核磁共振谱图，在小分子片段筛选得到了11种FXR的新配体。再通过Alphascreen实验进一步测定筛选得到体外活性更好的FXR的配体。将这11种小分子化合物扩展应用到ERRγ上，筛选得到与ERRγ蛋白质亲和性好的小分子化合物，并据此衍生得到亲和力更高的6‑硝基吲哚化合物。本发明筛选得到的新配体及其衍生物，可通过进一步的分子优化来制备全新结构的FXR调节剂和ERRγ调节剂，为治疗与FXR相关的疾病或者与ERRγ相关的疾病提供新的有效药物。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种法尼醇X受体的新配体及其筛选方法和应用。

背景技术

法尼酯衍生物X受体(Farnesoid X Receptor,FXR)是核激素受体超家族成员之一，是体内胆汁酸的感应器。FXR通过调节胆汁酸合成限速酶cholesterol 7alpha-hydroxylase(CYP7A1)活性而调控体内胆汁酸的稳态。目前的研究发现FXR在调控胆汁酸、脂蛋白和葡萄糖代谢、肝再生、肠道细菌生长以及肝毒素应答反应等多个过程中扮演重要作用。另外，激活FXR能降低血液中甘油三脂和葡萄糖水平，其中的机制可能是通过抑制肝脏中关键的调节基因表达以及在周缘组织中调节胰岛素敏感性。所以寻找高效的FXR的调节剂在治疗糖尿病及脂代谢类疾病中具有重要作用。在内源性的胆汁酸中，鹅去氧胆酸CDCA是亲和力最高的天然配体。然而据报道，富含CDCA的饮食会导致小鼠的肝脏肥大，并且在哺乳动物中，CDCA并不是特异性靶向FXR的。而GW4064会导致体重增加和脂肪积聚，INT-747，PX-102和WAY-362450是合成的FXR的激动剂，现在正在开发用于治疗血脂异常，糖尿病，初级胆汁性肝硬化或者非酒精性脂肪肝，但这些合成的小分子的安全性仍是一个重大的问题。所以开发出具有全新结构的FXR调节剂具有重要的意义。

雌激素相关受体(ERRs)与FXR同样属于核受体亚家族,包含ERRα,ERRβ和ERRγ3个成员；其主要在高能量需求组织中表达,在线粒体功能、线粒体融合、能量代谢以及氧化应激水平等方面发挥着重要的作用，有研究表明其在神经系统疾病中也具有重要作用。在没有外源配体存在时，ERRs被证明具有组成型转录活性。ERRγ在胎儿大脑表达水平很高，但在肝脏表达很少，几乎检测不到，而在成人体内，ERRγ广泛存在于脑、心、肾、肝脏、胰腺，胎盘和骨骼肌中。最近研究发现，ERRγ可以参与糖异生作用而ERRγ抑制剂可以减少肝糖原的产生。ERRγ影响胰岛素生成信号，一方面可以维持血糖平衡，但也会引起2型糖尿病和肝损伤。在神经生物学方面，可以影响神经细胞元分化。另外，ERRγ可以显著地促进棕色脂肪细胞与白色脂肪细胞的分化。ERRγ和ERRα一起参与葡萄糖和谷氨酰胺代谢，调节线粒体活性，脂质代谢和能量代谢。在乳腺癌病人乳腺组织中，ERRγ参与肿瘤细胞的代谢和增殖过程，用作乳腺癌生物发展标志和药物治疗靶标。在小鼠肝脏中，ERRγ参与调节血糖、血脂、酒精和铁代谢。因此，ERRγ可作为肿瘤及代谢性疾病的新型治疗靶点，基于雌激素相关受体开发出来的小分子调节剂，极有可能成为治疗相关疾病(肿瘤及糖尿病等)的新药物分子。

发明内容

基于此，本发明提供了一种法尼醇X受体的配体筛选方法。用该方法简单有效的筛选得到了多种法尼醇X受体的新配体。

具体技术方案如下。

一种法尼醇X受体的配体筛选方法，包括以下步骤：

(1)首次筛选：配制FXR-LBD蛋白样品溶液：用缓冲溶液以及D₂O配制FXR-LBD蛋白样品溶液，所述FXR-LBD蛋白样品溶液中FXR-LBD蛋白的浓度为5-15μM的；

配制小分子化合物的混合溶液：将待筛选的小分子化合物编组，每组5-15个，每组小分子化合物共同溶解于DMSO-d₆中，每个小分子化合物的浓度为15-25mM，即得各组小分子化合物的混合溶液；