[发明专利]法尼醇X受体的新配体及其筛选方法和应用

权利要求书

1.一种法尼醇X受体的配体筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)首次筛选：配制FXR-LBD蛋白样品溶液：用缓冲溶液以及D₂O配制FXR-LBD蛋白样品溶液，所述FXR-LBD蛋白样品溶液中FXR-LBD蛋白的浓度为5-15μM的；

配制小分子化合物的混合溶液：将待筛选的小分子化合物编组，每组5-15个，每组小分子化合物共同溶解于DMSO-d₆中，每个小分子化合物的浓度为15-25mM，即得各组小分子化合物的混合溶液；

配制核磁样品溶液：移取蛋白样品溶液至塑料管中，每管480-490μL；然后在每管中分别加入1组小分子化合物的混合溶液，每管10-20μL；混匀、静置或离心，即得所述核磁样品溶液；

核磁共振检测：将所述核磁样品溶液转移至核磁管中，依次进行核磁共振检测，采集一维氢谱；

(2)二次筛选：二次筛选时每管核磁样品溶液中只含1-2个化合物，其它条件与首次筛选的条件相同，检查每个化合物的谱图，确认STD和WaterLOGSY都出峰的小分子化合物，二次筛选得到的小分子化合物即为法尼醇X受体的小分子配体，其结构如下：

2.根据权利要求1所述的法尼醇X受体的配体筛选方法，其特征在于，还包括以下步骤：

通过Alphascreen实验检测筛选得到的小分子化合物对法尼醇X受体的激动活性；和/或

通过X-射线晶体衍射检测FXR-LBD蛋白与筛选得到的小分子化合物形成的复合物的晶体结构，以确定小分子化合物与FXR-LBD蛋白的结合方式和结合能力；和/或

通过等温滴定微量热实验检测筛选得到的小分子化合物与法尼醇X受体蛋白的亲和力。

3.根据权利要求1或2所述的法尼醇X受体的配体筛选方法，其特征在于，所述缓冲溶液为含290-310mM NaCl和0.9-1.1mM DTT的HEPES缓冲液，其中HEPES的浓度为38-42mM，pH为7.8-8.2。

4.根据权利要求1或2所述的法尼醇X受体的配体筛选方法，其特征在于，所述FXR-LBD蛋白样品溶液中D₂O的体积分数为45-55％。

5.小分子化合物在制备法尼醇X受体调节剂中的应用，其特征在于，所述小分子化合物选自以下小分子化合物中的至少一种：

6.根据权利要求5所述的小分子化合物在制备法尼醇X受体调节剂中的应用，其特征在于，所述小分子化合物选自以下小分子化合物中的至少一种：

7.根据权利要求6所述的小分子化合物在制备法尼醇X受体调节剂中的应用，其特征在于，所述法尼醇X受体调节剂为法尼醇X受体抑制剂，所述小分子化合物选自以下小分子化合物中的至少一种：

8.根据权利要求6所述的小分子化合物在制备法尼醇X受体调节剂中的应用，其特征在于，所述法尼醇X受体调节剂为法尼醇X受体激动剂，所小分子化合物为：

9.小分子化合物在制备雌激素相关受体的调节剂中的应用，其特征在于，所述小分子化合物选自以下小分子化合物中的至少一种：

10.根据权利要求9所述的小分子化合物在制备雌激素相关受体的调节剂中的应用，其特征在于，所述小分子化合物选自以下小分子化合物中的至少一种：