[发明专利]基于col2a1启动子的eGFP表达载体构建及在转基因斑马鱼中的应用

权利要求书

1.一种核酸构建物，所述核酸构建物含有斑马鱼col2a1启动子和与所述启动子操作性连接的荧光蛋白的编码序列。

2.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，

所述col2a1启动子的序列如SEQ ID NO:1所示；和/或

所述荧光蛋白选自绿色荧光蛋白(GFP)、增强型GFP、红移荧光蛋白和蓝色荧光蛋白；优选地，所述荧光蛋白的编码序列如SEQ ID NO：2所示；和/或

所述核酸构建物还含有Poly A序列和归位酶I-SceI酶切位点；

优选地，所述Poly A的序列如SEQ ID NO：3所示；

优选地，所述I-SceI酶切位点的序列如SEQ ID NO:8所示。

3.如权利要求1－2中任一项所述的核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物是表达载体；

优选地，所述表达载体以载体pBluescriptII为骨架构建；

更优选地，所述表达载体以pBluescriptII为骨架构建，在pBluescriptII多克隆位点的两端插入归位酶I-SceI酶切位点，在两个归位酶I-SceI酶切位点之间依次插入col2a1启动子序列、荧光蛋白编码序列和Poly A序列。

4.一种提供转基因斑马鱼的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)将权利要求3中所述的表达载体转入斑马鱼受精卵；和

(2)孵化步骤(1)获得的受精卵，收获带有荧光信号的转基因斑马鱼；

任选地，所述方法还包括：

(3)将步骤(2)获得的带有荧光信号的转基因斑马鱼进行交配，产生子代转基因斑马鱼。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

在受精卵产下后40～50分钟时，通过显微注射将所述表达载体转入受精卵中；和

转入所述表达载体后，将受精卵投入26～28℃的水中培养，从而获得转基因斑马鱼；

优选地，所述转基因斑马鱼中，荧光信号集中在脊椎和头部位置。

6.一种筛选对软骨发生和发育产生影响的化合物的方法，所述方法包括：

给予采用权利要求4－5中任一项所述方法构建得到的转基因斑马鱼所述化合物；和分析该化合物对该转基因斑马鱼软骨细胞和组织的影响。

7.采用权利要求4－5中任一项所述方法构建得到的转基因斑马鱼在筛选对软骨发生和发育产生影响的化合物或基因中的应用。

8.一种筛选治疗或预防骨关节炎的药物的方法，所述方法包括：

给予采用权利要求4－5中任一项所述方法构建得到的转基因斑马鱼待测化合物，和分析所述待测化合物对软骨细胞和组织的影响；

其中，将能促进软骨细胞生长的待测化合物作为治疗或预防骨关节炎的候选药物。

9.采用权利要求4－5中任一项所述方法构建得到的转基因斑马鱼在筛选治疗或预防骨关节炎用的药物中的用途。

10.一种多核苷酸序列，选自：

(1)如SEQ ID NO：1所示的多核苷酸序列；和

(2)(1)所述序列的互补序列。