[发明专利]一种猪H1N1亚型流感病毒血凝素重组蛋白的制备方法及该病毒抗体的液相芯片检测试剂盒

说明书

本发明首先提供了猪流感病毒的血凝素重组蛋白的制备方法，通过去除HA的信号肽。根据HA序列设计一对带有HIS标签的引物，构建了带有6*His‑麦芽糖结合蛋白（MBP）组合标签的原核表达质粒。在大肠杆菌表达系统中成功获得以可溶形式表达的HA重组蛋白。该蛋白能够与H1N1亚型猪流感病毒HA鼠源抗体发生反应，说明了HA重组蛋白具有良好的抗原性，利用该凝素重组蛋白建立液相芯片检测技术，灵敏度比ELISA高，该方法的建立，将为开展猪流感病毒抗体的检测提供必要的技术补充，为其它疫病抗体液相芯片检测技术的研究奠定技术基础，为多种猪病抗体多重液相芯片检测技术的建立提供试验依据。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，更具体地，涉及一种猪H1N1亚型流感病毒血凝素重组蛋白的制备方法及该病毒抗体的液相芯片检测试剂盒。

背景技术

猪流感(Swine Influenza，SI)是猪流感病毒(Swine Influenza virus，SIV)引起的一种急性、热性、高度接触性呼吸道传染病，临床上以突发、咳嗽、高热、呼吸困难、精神沉郁、高发病率、低病死率为特征。目前，全球猪群中以经典猪流感H1N1和类人H3N2亚型为主广泛流行，尽管猪流感死亡率低，但是其可造成其他病原的继发感染，对养殖业造成巨大的经济损失。猪是人、禽流感病毒的易感宿主，是流感病毒跨种传播的中间宿主，是流感病毒基因重组的“混合器”，是引起流感大爆发的重要原因。2009年，甲型H1N1流感病毒(pdm2009)在墨西哥、美国相继爆发，该流行毒株是由人流感、猪流感和禽流感病毒基因自然重组而形成的一种新型流感病毒。该毒株的PB1基因来于H3N2人流感，PA和PB2基因来自于北美禽流感，NA和M基因来自欧亚类禽猪流感，HA、NP和NS基因来自经典猪流感。该毒株能通过抗原的变异逃避机体的免疫系统，短时间内迅速蔓延至全球，造成流感的大流行，而引起人们的关注。在猪场内进行定期的SIV抗体监测对于预防其它疾病的出现，以及在人群中流行具有重要的公共卫生学意义。

液相芯片技术又称为Luminex技术、xMAP技术，是美国Luminex公司于20世纪90年代中期开发的一种多功能液相生物芯片检测技术。该技术集流式细胞技术、荧光技术、激光技术、传统的化学技术和计算机处理系统为一体新型多通道高通量生物芯片检测体系，具有高通量、重复性好、快速准确的特点。目前，液相芯片检测技术已被广泛应用于食品生产、医疗保健、环境卫生等领域的微生物检测，在呼吸道、虫媒介等病毒检测、细菌检测、基因检测、药物残留、细胞因子检测等方面广泛应用。2001年12月，美国食品与药物管理局(FDA)批准了用于临床诊断的液相芯片检测技术，该技术是唯一一个被FDA认证了的诊断技术。

目前，猪流感病毒抗体诊断方法主要为血凝抑制试验(hemagglutinationinhibition test，HI)和微量中和试验(Microtitre neutralization test，MIVN)。其中，HI检测方法简单、易操作，但敏感性较差；MIVN检测方法敏感性和特异性好，但操作繁琐、周期长。鉴于此，需要建立一种操作简便、敏感性高、特异性强的方法，对目前进行补充和校对。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，首先提供一种猪流感病毒的血凝素重组蛋白的制备方法。

本发明的第二个目的是提供上述方法制备得到的猪流感病毒的血凝素重组蛋白。

本发明的第三个目的是提供所述猪流感病毒的血凝素重组蛋白作为免疫原在制备检测猪流感病毒的试剂中的应用。

本发明的第四个目的是提供一种检测猪流感病毒的试剂盒。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：

一种猪流感病毒的血凝素重组蛋白的制备方法，包括以下步骤：