[发明专利]载有药物的维生素B12

权利要求书

1.一种载有药物的维生素B₁₂衍生物自组装纳米微粒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(A)将药物溶解于六氟异丙醇中，得到溶液A；将苯丙氨酸二肽溶解于六氟异丙醇中，得到溶液B；将如式I所示的可自主装形成纳米微粒的维生素B₁₂衍生物溶解于六氟异丙醇中，得到溶液C；

(B)将有机溶剂X或有机溶剂X溶液与溶液A混匀，得到溶液D；有机溶剂X为乙醇、丙酮或乙酸乙酯；

(C)将溶液B和溶液C混匀后加入到溶液D中，混匀，得到溶液E；

(D)将溶液E与水混匀，再加入PEG200，混匀，得到溶液F；冷冻干燥，加入水复溶重悬，得到载有药物的维生素B₁₂衍生物自组装纳米微粒；

2.根据权利要求1所述载有药物的维生素B₁₂衍生物自组装纳米微粒的制备方法，其特征在于：

所述的溶液A中的药物的浓度为20mg/ml；

所述的溶液B中的苯丙氨酸二肽的浓度为100mg/ml；

所述的溶液C中可自主装形成纳米微粒的维生素B₁₂衍生物的浓度为1mg/ml；

所述的溶液D中，药物的浓度为4mg/ml，有机溶剂X的浓度为体积百分比40％；

所述的有机溶剂X溶液的浓度为体积百分比50％；

所述的溶液E中，药物的浓度为3.3mg/ml，有机溶剂X的浓度为体积百分比33％，苯丙氨酸二肽的浓度为13.3mg/ml，可自主装形成纳米微粒的维生素B₁₂衍生物的浓度为0.03mg/ml；

所述的溶液F中，药物的浓度为0.1mg/ml，有机溶剂X的浓度为体积百分比10％，苯丙氨酸二肽的浓度为4mg/ml，可自主装形成纳米微粒的维生素B₁₂衍生物的浓度为0.01mg/ml，PEG200的终浓度为体积百分比1％。

3.根据权利要求1所述载有药物的维生素B₁₂衍生物自组装纳米微粒的制备方法，其特征在于：所述的药物为多肽类药物和/或蛋白类药物。

4.根据权利要求1所述载有药物的维生素B₁₂衍生物自组装纳米微粒的制备方法，其特征在于：所述的可自主装形成纳米微粒的维生素B₁₂衍生物通过如下步骤制备得到：

(1)酰胺类中间产物的制备：

①将磷酸鎓盐类耦合剂、DMF、DIEA和Boc-苯丙氨酸二肽混合，超声水浴反应，得到酰胺类中间产物X₁；

②将DMF、碳二亚胺类耦合剂、HOAT和Boc-苯丙氨酸二肽混合，超声水浴反应，得到酰胺类中间产物X₂；

(2)维生素B₁₂-OP的制备：

往步骤(1)①得到的酰胺类中间产物X₁或步骤(1)②得到的酰胺类中间产物X₂中加入维生素B₁₂-OD，超声水浴反应，再加入乙酸乙酯终止反应，离心、弃上清、取沉淀、干燥，得到维生素B₁₂-OP；

其中，参与反应的各原料按如下摩尔比配比：

通过酰胺类中间产物X₁得到维生素B₁₂-羰基-腐胺时，维生素B₁₂-羰基-腐胺：磷酸鎓盐类耦合剂：Boc-苯丙氨酸二肽：DIEA＝1：1～4：0.75～3：0.5～2；

通过酰胺类中间产物X₂得到维生素B₁₂-羰基-腐胺时，碳二亚胺类耦合剂：HOAT：Boc-苯丙氨酸二肽：维生素B₁₂-羰基-腐胺＝0.75～3：0.75～3：0.75～3：1；

还包括将步骤(2)得到的维生素B₁₂-OP经C18反相柱脱盐以及将脱盐产物通过半制备高效液相色谱进一步纯化的步骤。