[发明专利]一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法

说明书

本发明涉及一种从蓝靛果中快速高效提取纯化矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷的方法，所采取的技术方案是：以蓝靛果提取物为原料，采取高速匀质破碎酶解技术、负压空化强化提取技术、低温絮凝沉降技术、中压快闪反相柱层析技术及重结晶技术等得到精制的矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷，纯度可达95％以上。本发明方法绿色环保，步骤少，耗时短，目标化合物的损失少，产品得率和纯度都很高，适合于规模化生产，具有较高的经济价值。

技术领域

本发明涉及一种从蓝靛果中提取纯化功能性有效成分花色苷的方法，具体是从蓝靛果中快速高效提取纯化矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的方法。

背景技术

蓝靛果(Lonicera caerulea L.)为忍冬科忍冬属，多年生落叶小灌木。具有清热解毒、稳定血压、改善肝脏的解毒功能、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗疲劳、调节免疫、保护视力、促进身体良好发育等功效。蓝靛果果实中富含花色苷类化合物，花色苷是一种广泛存在于植物中的水溶性天然色素，是花青素与糖以糖苷键结合而成的一类化合物，结构母核是3,5,7-三羟基-2-苯基苯并吡喃阳离子。其安全、无毒、营养价值高、并且还具有清除自由基、改善视力、预防和治疗心血管疾病等一系列的药理作用，在食品、保健品、化妆品、医药等领域具有很大的开发应用潜力。

近年来，人工合成花色苷的途径比较复杂，且存在成本高、安全性低等特点，因此，从植物中提取、纯化花色苷已经成为当今研究的热点，富含花色苷的蓝靛果也成为学者们研究天然花色苷的重要原料之一。我国一般用有机溶剂提取法，超声波提取法和超临界流体萃取技术等。传统的有机溶剂提取法提取时间长，得率低；而超临界流体萃取花色苷，又存在投资大，能耗大等缺点。本发明的不同之处在于探究了一条经济、有效、绿色的提取和纯化蓝靛果花色苷的技术，不仅得率高,而且纯度高，促进了我国蓝靛果的资源深度开发和高效利用。

发明内容

本发明旨在提供一种简单、绿色、快速、高效、低成本、高收率，从蓝靛果中提取分离纯化矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的熟化路线。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法，其特征在于按如下工艺步骤进行：

A.高速匀质破碎酶解蓝靛果原料：新鲜的蓝靛果按质量体积比加入3～8倍原料质量的水进行高速匀质破碎5～10min，用冰醋酸或柠檬酸调节浆液pH为3.5～5.5，加入纤维素酶、果胶酶或两者组成的复合酶使酶浓度为300～700U/mL，然后在35～50℃条件下酶解2～5h，过滤，收集滤液、滤渣；

B.负压空化强化提取蓝靛果滤渣：上述滤渣按质量体积比加入10～20倍滤渣质量的乙醇或醇水混合溶液进行负压空化强化提取，提取温度为25～40℃，提取压力为-0.04～-0.08MPa，提取2～4次，每次30～60min，合并提取液与步骤A所得滤液，减压除去2/3溶液。

C.低温絮凝沉降蓝靛果浓缩滤液：上述浓缩滤液中加入50％～70％的乙醇配置饱和溶液后搅拌均匀，置于0～8℃下放置24～48h，分离得到上清液和沉淀，再将沉淀在35～50℃下减压干燥，得富集物。

D.中压快闪反相柱层析分离矢车菊素-3-O-葡萄糖苷：上述低温絮凝沉降富集物加入20％甲醇至刚好溶解后进行中压快闪反相色谱柱层析。其中柱填料为ODS-C₁₈反相硅胶：上样体积为柱体积的1/12～1/5；等度洗脱选用的洗脱剂为20％甲醇，洗脱流速为20～35mL/min，然后在检测波长520nm下进行HPLC的检测，合并相同流份，减压浓缩至干，得到矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体。

E.矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的结晶：矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体用50％～70％的乙醇反复重结晶得到纯度可达95％的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷。

本发明具有如下优点：

1.本发明对蓝靛果资源进行高效合理的利用，产品的附加值高。