[发明专利]一种从黑加仑果渣中提取分离纯化四种主要花色苷的方法

说明书

本发明涉及一种从黑加仑果渣中提取分离纯化四种主要花色苷的方法。目的是提供一种简便、经济、绿色环保、收率高的从黑加仑果渣中提取分离纯化四种高纯度花色苷的方法。该方法以工业生产加工后的黑加仑废渣为原料采用匀浆破碎偶合酶水解技术、负压空化强化提取技术、大孔吸附树脂树脂富集技术、中压快闪反向色谱分离技术以及低温晶析和重结晶技术等得到纯度可达95％的飞燕草素3‑O‑葡萄糖苷、飞燕草素3‑O‑芸香糖苷、矢车菊素3‑O‑葡萄糖苷和矢车菊素3‑O‑芸香糖苷四种花色苷单体成分。该方法的原料丰富易得、工艺耗时短、溶剂消耗少、所得花色苷纯度高、生产成本低，适合用于规模化工业化生产。

技术领域

本发明涉及一种从黑加仑果渣中提取分离纯化高纯度四种花色苷的方法，属于植物次生代谢产物分离纯化领域。

背景技术

黑加仑，学名黑穗醋栗(Ribes nigrruu L.)，俗称黑豆果，别名黑夏果，为虎耳草科(saxifragaceae)、茶蕉子属(Ribes)的一种落叶小灌木，主产于我国东北地区和新疆北部，其果实为暗紫褐色小浆果，可以食用，也可以加工成果汁、果酱等食品。黑加仑含有丰富的糖、有机酸、多种维生素、花色苷、活性矿物质及特殊芳香成分，具有很高的营养价值和药用价值。其中总花色苷含量为3.5mg/g鲜果重(张志东2002)。目前己经知道的黑加仑的治疗功能包括痛风、肾结石、膀肤炎、出疹热、蛋白尿、贫血病、水肿、风湿病、痢疾、胃肠炎、口腔和咽喉疾病、支气管咳嗽等(赵新淮1998)。

花色苷(Anthocyanin)是一类广泛存在于植物中的水溶性色素,属于类黄酮化合物，花色苷是花青素与糖以糖苷键结合而成的一类化合物，广泛存在于植物的花、果实、茎、叶和根器官的细胞液中，使其呈现由红、紫红到兰等不同颜色。花色苷它不但是一种很好的天然食用色素,而且具有美容、养颜、降脂、减肥和抗衰老等重要的生理功能(金海英2006)。花色苷的主要作用在于清除自由基，对花色苷成分药理研究发现其有促进视红素再合成、改善循环、抗溃疡、抗炎症等多种药理活性,可以明显改善用眼疲劳(李春阳2006)。黑加仑浆果资源在工厂生产黑加仑果制品后，剩余的果渣现在基本上一部分作为粗加工产品如果酱，果糖等的原料，附加值低，另一部分作废弃物处理，造成了资源的浪费。黑加仑果皮富含天然花色苷，是食品工业不可缺少的基本原料。黑加仑果皮中主要含有四种花色苷，分别是飞燕草素3-O-葡萄糖苷、飞燕草素3-O-芸香糖苷、矢车菊素3-O-葡萄糖苷和矢车菊素3-O-芸香糖苷。到目前为止分离纯化花色苷单体的方法一般都是用半制备高效液相色谱或高速逆流色谱法等，这些方法普遍存在设备昂贵、方法烦琐等缺点，且无法进行大规模的分离纯化，在实际生产中难以得到应用，使得花色苷产品大量缺乏，价格非常昂贵。

本发明以工业生产过程中产生的废弃果渣为原料，提出了一种通过多种现代分离技术手段相结合的方法，实现经济有效、简单快速、损失少且绿色环保的提取、分离和纯化黑加仑花色苷的方法，可实现黑加仑花色苷的产业化生产，为食品工业以及其应用提供一种良好的天然黑加仑花色苷，产品纯度高,，大大提高了产品的附加值，对浆果加工产业具有重要的推动作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以黑加仑果渣为原料，通过匀浆破碎偶合酶水解技术、负压空化提取技术、大孔吸附树脂技术、中压快闪反相硅胶柱层析分离技术及低温析晶和重结晶技术，达到快速、简单获得黑加仑花色苷单体。该方法分离纯化工艺简单易行，操作安全，产品得率高以及纯度高，同时适用于工业应用。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

(1).匀浆破碎偶合酶水解黑加仑果渣：将黑加仑果渣按质量体积比加入5～9倍原料质量的水进行匀浆破碎三次，每次4～9min，用柠檬酸或盐酸调节浆液pH为3～6，按果渣质量比20～60mg/g加入纤维素酶、果胶酶或上述两种酶的混合酶，然后将浆液放入恒温摇床中，在温度20～50℃酶解1～5h，抽滤，收集滤液滤渣。