[发明专利]基于纳米金‑DNA复合材料检测蛋白质的方法

权利要求书

1.基于纳米金-DNA复合材料检测蛋白质的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、纳米金颗粒的制备：通过柠檬酸钠还原氯金酸制得，氯金酸溶液浓度为50mM，氯金酸和柠檬酸钠的摩尔比为3.5-3.8:1，所得溶液中纳米金颗粒的平均粒径为13-18nm；

S2、纳米金-DNA复合物的制备：向上述含有纳米金颗粒的溶液50μL中加入浓度为1μM的一端修饰有巯基的DNA溶液10μL，所述DNA为poly(A)₁₅，得到纳米金-poly(A)₁₅复合物；

S3、向上述含有纳米金-DNA复合物的溶液60μL中分别加入M1浓度的11种蛋白质溶液各50μL，于37℃孵育10min；同时以ddH₂O为空白对照，即向上述含有纳米金-DNA复合物的溶液60μL中加入ddH₂O 50μL，于37℃孵育30min；

其中，所述11种蛋白质包括胰蛋白酶、牛血红蛋白、牛血清蛋白、人血清蛋白、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、辣根过氧化酶、软铁蛋白、细胞色素-C、纤维原蛋白和刀豆球蛋白；

S4、纳米金催化硝基苯酚和硼氢化钠反应生成氨基苯酚：向S3所得溶液110μL中加入浓度为5mM的硝基苯酚溶液200μL和浓度为0.6M的硼氢化钠溶液200μL，利用裸露的纳米金表面催化其反应；

S5、目测观察溶液由黄色变成无色的反应时间，即CCT值，分别记下不同蛋白质对应的CCT值，以及空白对照ddH₂O对应的CCT₀值，并分别计算不同蛋白质对应的CCT/CCT₀值，绘制表格；

S6、将所述DNA替换为poly(C)₁₅，重复S1～S5；

S7、将所述DNA替换为poly(T)₁₅，重复S1～S5；

S8、将针对上述三种DNA绘制的反应不同蛋白质CCT/CCT₀值的表格输入软件IBM SPSS Statistics 19，从而得到不同蛋白质对应的LDA图；

S9、按照S1和S2分别制备针对上述三种DNA的纳米金-DNA复合物溶液，分别向三种纳米金-DNA复合物溶液60μL中加入M1浓度的待测蛋白质溶液50μL，于37℃孵育30min；同时以ddH₂O为空白对照；

S10、向S9所得溶液110μL中加入浓度为5mM的硝基苯酚溶液200μL和浓度为0.6M的硼氢化钠溶液200μL，进行反应；目测观察溶液由黄色变成无色的反应时间，并计算CCT/CCT₀值，代入S8所述软件中，根据LDA图显示结果，对待测蛋白质进行识别；

步骤S3和S9中，300nM≤M1≤2000μM；

所述poly(A)₁₅是由15个碱基A组成的DNA片段，所述poly(C)₁₅是由15个碱基C组成的DNA片段，所述poly(T)₁₅是由15个碱基T组成的DNA片段。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S3中每种蛋白质做5～6个重复。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，M1为300nM或500nM。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，S9中各反应试剂的用量及反应条件同S3；S10中各反应试剂的浓度、用量及反应条件同S4。