[发明专利]一种基于冠心病心阳虚证的代谢标记物的鉴定方法

说明书

一种基于冠心病心阳虚证的代谢标记物的鉴定方法，本发明涉及代谢标记物的鉴定方法。本发明是要解决临床冠心病心阳虚证的诊断仍不具备足够敏感性造成方剂体内成分与疗效关系难以有效揭示的问题，而提出的一种基于冠心病心阳虚证的代谢标记物的鉴定方法。该方法是通过步骤一、利用UPLC‑G2‑Si‑HDMS方法对n组健康受试者和n组冠心病心阳虚证受试者的血清样品进行UPLC分析确定血清样品中内源性代谢物；步骤二、利用G2‑Si‑HDMS方法在正、负离子模式下对内源性代谢物进行全扫描确定内源性代谢物结构；步骤三、鉴定冠心病心阳虚证受试者血液代谢生物标记物等步骤实现的。本发明应用于代谢标记物的鉴定领域。

技术领域

本发明涉及代谢标记物的鉴定方法，特别一种基于冠心病心阳虚证的代谢标记物的鉴定方法。

背景技术

冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病,CHD)是临床常见的心血管疾病之一，该病的发病率逐年增高，被称为“人类健康的第一杀手”。冠心病病因病机可简要归纳为心阳不足、痰瘀内生。因心阳不足，运血无力则血行瘀滞致瘀阻心脉；心阳虚弱则阴寒邪气上乘阳位；阴邪最易痹阻胸阳而致冠心病的发生。曹洪欣等通过对118例冠心病病人的临床观察，心阳虚证共62例,占52.54％，说明心阳虚证是冠心病的重要病理基础。心阳具有温煦、推动等作用，既是保证心脏本身发挥其生理功能的必要条件，又是心主血脉功能的主要动力。心阳不足，无以温煦、运行津液，无力推动血行，寒邪趁虚侵袭，凝滞气机，收引血脉，致心脉拘缩挛急而突发剧痛。近年来,诸多学者运用现代技术手段和方法对冠心病心阳虚证的病理机制、治疗和预防等方面进行了广泛的研究,取得了一定进展；但关于临床冠心病心阳虚证的诊断仍不具备足够敏感性。

然而，由于证候缺乏客观的诊断标准，致使方剂疗效难以正确评价，最终造成方剂体内成分与疗效关系难以有效揭示。代谢组学是解决此问题最有效的技术之一，它既能够以代谢轮廓宏观诊断证候，以代谢指纹准确把握证候变化，又能以生物标记物的含量变化微观精准地表征证候各阶段的生物学特征，并以此反映方剂的治疗效应。

发明内容

本发明的目的是为了解决临床冠心病心阳虚证的诊断仍不具备足够敏感性造成方剂体内成分与疗效关系难以有效揭示的问题，而提出的一种基于冠心病心阳虚证的代谢标记物的鉴定方法。

上述的发明目的是通过以下技术方案实现的：

步骤一、利用UPLC-G2-Si-HDMS方法对n组健康受试者和n组冠心病心阳虚证受试者的血清样品进行UPLC分析确定血清样品中内源性代谢物；

步骤二、利用G2-Si-HDMS方法在正、负离子模式下对内源性代谢物进行全扫描得到质谱代谢轮廓图；根据质谱代谢轮廓图进行模式识别及统计分析，选取保留时间和质核比一致的数据进行鉴定确定内源性代谢物结构；

步骤三、鉴定冠心病心阳虚证受试者血液代谢生物标记物；

步骤三一、将内源性代谢物进行监督型OPLS-DA分析，分析得到正、负离子模式下的血液样本OPLS-DA模型二维得分Scores plot；根据得分Scores plot分析血液样本数据；

步骤三二、使用PCA，OPLS-DA获得潜在的生物标记物，根据分析的血液样本数据从OPLS-DA模型的S-plot列表中获得潜在生物标记物的各离子质量数；

步骤三三、根据内源性代谢物结构获得的内源性代谢物结构分子式以及潜在的生物标记物离子获得的二级质谱信息进行独立样本t检验鉴别了38个生物标记物；