[发明专利]转基因玉米品系VCO-01981-5检测方法和试剂

说明书

本申请公开了一种转基因玉米品系VCO‑01981‑5检测方法和试剂。本申请的检测方法，包括在PCR反应体系中加矿物油，混匀转移到微滴发生器产生微滴，然后进行PCR反应，结束后，读取每个微滴扩增信号，用QuantaSoft软件计算待测样品的靶标DNA分子数；PCR反应体系中包括品系VCO‑01981‑5和HMG基因特异引物和探针，两条探针分别采用FAM和HEX荧光标记。本申请的定量检测方法，设计配套使用的内源基因HMG和品系特异性引物探针，采用双通道法，分别定量出两者在玉米基因组中的分子数，计算出转基因玉米品系VCO‑01981‑5绝对含量，对转基因成分的研究和我国口岸转基因检测具有重要意义。

技术领域

本申请涉及转基因玉米检测领域，特别是涉及一种转基因玉米品系VCO-01981-5定量检测方法和试剂。

背景技术

转基因农作物自1996年商业化种植以来，全球转基因作物种植面积迅猛发展。截止2013年全球转基因作物种植面积已达到约1.75亿公顷，比2012年增长3％。按照种植面积统计，全球约81％的大豆、35％的玉米、30％的油菜和81％的棉花都是转基因产品。转基因作物种植面积排在前6位的国家是美国、巴西、阿根廷、加拿大、印度和中国。伴随转基因作物高速发展的同时，转基因作物的食品安全问题也一直是多年来讨论的热点，并直接影响到国际贸易和公众对转基因产品的接受程度。目前关注的焦点已从“是否是转基因”转移到“含有哪些转基因成分及各自的含量”，为满足公众知情权、管理水平和检测技术能力的需求，许多国家纷纷出台了转基因限量规定，如欧盟规定转基因作物的成分超过0.9％，必须进行标识；而日本的现行标准为5％。我国目前的标准最为严格，对转基因产品实行“零容忍”，只要在产品中检出转基因成分就需要进行标识。考虑到转基因低水平混杂等客观实际，目前这一“零容忍”政策在技术执法角度来讲过于苛刻，因此，从我国各口岸转基因检测水平的实际出发，为国家政策部门提出合理的转基因阈值迫在眉睫；首当其冲的便是开发转基因成分的精准定量检测方法。

转基因玉米VCO-01981-5是最新的耐草甘膦除草剂新品系，由总部设在巴黎的公司Genective S.A..(Group LIMAGRAIN与Group KWS的合资企业)开发，并于2013和2014年分别在美国和加拿大获准商业化生产和利用。该品系未获我国农业部批准，国际、国内也无相应的品系特异性定性或定量检测方法。因此，亟需研究一种有效的转基因玉米VCO-01981-5检测方法。

发明内容

本申请的目的是提供一种转基因玉米品系VCO-01981-5检测方法和试剂。

为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：

本申请公开了一种转基因玉米品系VCO-01981-5的检测方法，包括在PCR反应体系中加入矿物油，混匀后，将其转移到微滴发生器上，自动产生微滴，然后将微滴全部转移到反应管中进行PCR反应，PCR反应结束后，读取每个微滴的扩增信号，并采用QuantaSoftV1.3.2软件计算待测样品的靶标DNA分子数；PCR反应体系为双重实时荧光PCR扩增体系，包括PCR反应液、品系VCO-01981-5特异引物组、品系VCO-01981-5特异探针、HMG基因特异引物组、HMG基因特异探针和待测样品的DNA；品系VCO-01981-5特异引物组的正向引物为Seq IDNo.1所示序列，品系VCO-01981-5特异引物组的反向引物为Seq ID No.2所示序列，品系VCO-01981-5特异探针为Seq ID No.3所示序列，HMG基因特异引物组的正向引物为Seq IDNo.4所示序列，HMG基因特异引物组的反向引物为Seq ID No.5所示序列，HMG基因特异探针为Seq ID No.6所示序列；

Seq ID No.1：5’-aaggccttcagtctactcctcggg-3’

Seq ID No.2：5’-ctagcggccgctactcgagggattt-3’