[发明专利]转基因玉米品系VCO-01981-5检测方法和试剂

权利要求书

1.一种转基因玉米品系VCO-01981-5的检测方法，其特征在于：包括在PCR反应体系中加入矿物油，混匀后，将其转移到微滴发生器上，自动产生微滴，然后将微滴全部转移到反应管中进行PCR反应，PCR反应结束后，读取每个微滴的扩增信号，并采用QuantaSoftV1.3.2软件计算待测样品的靶标DNA分子数；

所述PCR反应体系为双重实时荧光PCR扩增体系，包括PCR反应液、品系VCO-01981-5特异引物组、品系VCO-01981-5特异探针、HMG基因特异引物组、HMG基因特异探针和待测样品的DNA；

所述品系VCO-01981-5特异引物组的正向引物为Seq ID No.1所示序列，品系VCO-01981-5特异引物组的反向引物为Seq ID No.2所示序列，所述品系VCO-01981-5特异探针为Seq ID No.3所示序列，所述HMG基因特异引物组的正向引物为Seq ID No.4所示序列，HMG基因特异引物组的反向引物为Seq ID No.5所示序列，所述HMG基因特异探针为Seq IDNo.6所示序列；

Seq ID No.1：5’-aaggccttcagtctactcctcggg-3’

Seq ID No.2：5’-ctagcggccgctactcgagggattt-3’

Seq ID No.3：5’-cgtcaccaagaagatcagtactcaaacac-3’

Seq ID No.4：5’-TTGGACTAGAAATCTCGTGCTGA-3’

Seq ID No.5：5’-GCTACATAGGGAGCCTTGTCCT-3’

Seq ID No.6：5’-CAATCCACACAAACGCACGCGTA-3’

其中，Seq ID No.3所示序列的品系VCO-01981-5特异探针中，5’末端具有FAM荧光基团，3’末端具有BHQ-1淬灭基团；Seq ID No.6所示序列的HMG基因特异探针中，5’末端具有HEX荧光基团，3’末端具有BHQ-1淬灭基团；

所述检测方法还包括，采用QuantaSoft V1.3.2软件分别计算出转基因玉米品系VCO-01981-5的分子数和HMG基因分子数后，根据转基因玉米品系VCO-01981-5分子数和HMG基因分子数的比值，计算转基因玉米品系VCO-01981-5的绝对含量。

2.一种转基因玉米品系VCO-01981-5定量检测的试剂，其特征在于：所述试剂包括第一引物探针组合和第二引物探针组合，所述第一引物探针组合用于品系VCO-01981-5特异性检测，所述第二引物探针组合用于HMG基因特异性检测；

所述第一引物探针组合中，正向引物为Seq ID No.1所示序列，反向引物为Seq IDNo.2所示序列，探针为Seq ID No.3所示序列，并且探针的5’末端具有FAM荧光基团，3’末端具有BHQ-1淬灭基团；

所述第二引物探针组合中，正向引物为Seq ID No.4所示序列，反向引物为Seq IDNo.5所示序列，探针为Seq ID No.6所示序列，并且探针的5’末端具有HEX荧光基团，3’末端具有BHQ-1淬灭基团。

3.根据权利要求2所述的试剂在制备转基因玉米检测试剂盒或检测设备中的应用。

4.一种转基因玉米检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中含有权利要求2所述的试剂。

5.根据权利要求4所述的转基因玉米检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒采用权利要求1所述的检测方法对转基因玉米品系VCO-01981-5进行定量检测。