[发明专利]一种硫酸皮肤素的制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种硫酸皮肤素的制备工艺，尤其涉及一种从肝素副产物制取硫酸皮肤素的工艺。

背景技术

硫酸皮肤素为二糖聚合物，是动物体内分布最广泛的一种细胞外基质糖胺多糖，为血管壁蛋白多糖的主要成份。硫酸皮肤素是糖胺聚糖的一种，由D-葡糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖以α-1，4-糖苷键连接而成的重复二糖单位组成的多糖，并在N-乙酰氨基半乳糖的C-4位或C-6位羟基上发生硫酸酯化。由于含有硫酸基团，整个cs分子呈现很强的负电性，易与蛋白质共价结合组成蛋白聚糖，同时也是其发挥生物学作用的重要基础。硫酸皮肤素作为结缔组织的重要组成部分，具有多种药理作用与生理功能，可用作药物和保健食品，主要用于骨关节炎和冠状动脉粥样硬化性心脏病。

长期以来，动物皮层是制备硫酸皮肤素的主要原料，早在60年代，Clifonelli·J·A和Roden·L等人就曾利用猪皮为原料制备硫酸皮肤素，但是该方法耗时耗力，耗费试剂，而且操作复杂收得的硫酸皮肤素的纯度不高。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种生产工艺简单、生产成本低、所得硫酸皮肤素纯度高的硫酸皮肤素的制备工艺，本发明采用超滤膜技术对洗脱液进行浓缩，去盐，简化了工艺步骤，缩短了工期。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种硫酸皮肤素的制备工艺，具体步骤如下：

(1)将肝素副产物放入纯化水中溶解成质量浓度为100g/L的溶液，在溶有肝素副产物的溶液中加入一定量的蛋白酶并保持溶液的PH为7～10，将溶有肝素副产物和蛋白酶的溶液升温至40～70℃并搅拌2～5h，即得酶解液；

(2)将步骤(1)中所得的酶解液冷却至室温后用阴离子交换树脂吸附8～10h，吸附过后用80目尼龙布过滤袋将阴离子交换树脂滤出；

(3)将收集在80目尼龙布过滤袋中的阴离子交换树脂用质量浓度为20～30g/L、流速为0.4～0.6Bv的盐水对阴离子交换树脂进行洗涤2～3次，洗涤液的用量为2～3个体积；

(4)将洗涤后的阴离子交换树脂再用质量浓度为40～60g/L的盐水对80目尼龙布过滤袋中的阴离子交换树脂进行洗脱并收集洗脱液，洗脱液的用量为4～6倍柱体积；

(5)将步骤(4)中所得的洗脱液用纳滤膜过滤除去盐的同时还将对洗脱液进行浓缩，将浓缩压力控制到3kg时停止浓缩，即得浓缩液；

(6)向步骤(5)中所得的浓缩液中加入乙醇并搅拌至乙醇浓度达到40～60％，静置1～2h，待上清液澄清后抽去上清液，再向沉淀中加入1.5倍乙醇脱水后用过滤器抽滤除尽乙醇，即得硫酸皮肤素沉淀；

(7)将步骤(6)中所得的硫酸皮肤素沉淀置于50～60℃的条件下干燥5～8h，即得硫酸皮肤素。

进一步地，所述步骤(1)中加入的蛋白酶为2709蛋白水解酶，加入的2709蛋白水解酶的量是肝素副产物的0.1％～1％。

进一步地，所述步骤(1)中在溶有肝素副产物的溶液中加入一定量的蛋白酶并调节溶液的PH为9，并将溶有肝素副产物和蛋白酶的溶液升温至45℃并搅拌5h。

进一步地，所述步骤(3)中用质量浓度为20g/L、流速为0.5Bv的盐水对阴离子交换树脂进行洗涤3次，洗涤液的用量为2个体积。

进一步地，所述步骤(4)中用质量浓度为60g/L的盐水对阴离子交换树脂进行洗脱并收集洗脱液，洗脱液的用量为5倍柱体积。

进一步地，所述步骤(5)中的纳滤膜选择孔径小于1000Da分子量。

进一步地，所述步骤(6)中向所得的浓缩液中加入乙醇并搅拌至乙醇浓度达到45％，静置2h。

进一步地，所述步骤(7)中的硫酸皮肤素沉淀置于55℃的条件下干燥8h。

与现有技术相比，本发明所达到的有益效果：

(1)本发明中在溶有肝素副产物的溶液中加入2709碱性蛋白水解酶，并将溶有肝素副产物和2709碱性蛋白酶的溶液升温至45℃并搅拌5h，加入的2709碱性蛋白水解酶不但能将大分子的蛋白质水解成游离的氨基酸等产物，还能调节溶液的PH，将溶液升温至45℃并搅拌是为了促进酶的水解反应。

(2)本发明中用质量浓度为20g/L、流速为0.5Bv的盐水对阴离子交换树脂进行洗涤3次，用盐水洗涤是为了抑制弱碱阴离子交换树脂中性盐的分解。

(3)本发明中采用超滤膜技术对洗脱液进行除盐的同时还对洗脱液进行了浓缩，这种超滤膜技术在常温下就可以达到浓缩提纯硫酸皮肤素的目的，不造成有效成分的破坏，简化了工艺步骤，缩短了生产工期。