[发明专利]细菌基因编辑方法有效
| 申请号： | 201610919263.1 | 申请日： | 2016-10-21 |
| 公开（公告）号： | CN106609279B | 公开（公告）日： | 2020-08-14 |
| 发明（设计）人： | 胡育诚;锺沐恩;叶懿心;李泓 | 申请（专利权）人： | 胡育诚;长春人造树脂厂股份有限公司;长春石油化学股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/74 |
| 代理公司： | 隆天知识产权代理有限公司 72003 | 代理人： | 王芝艳;吴小瑛 |
| 地址： | 中国台*** | 国省代码： | 台湾;71 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细菌 基因 编辑 方法 | ||
1.一种细菌基因编辑方法，其特征在于，所述细菌基因编辑方法包括步骤：
提供一菌体，其中所述菌体为蓝绿菌；
将一pHR_trc模板质粒和一pCas9-NSI质粒共同送入所述菌体中，以得到一培养菌液，其中所述pHR_trc模板质粒是将一pSYN_1质粒中的一sc启动子替换为一诱导型trc启动子所获得的，所述pCas9-NSI质粒是由一pCas9质粒嵌入一5’-gcctgaaagcgtgacgagca-3’序列所获得的；以及
将所述培养菌液涂布在一培养基上进行培养。
2.如权利要求1所述的细菌基因编辑方法，其特征在于，所述蓝绿菌为细长聚球藻的S.elongatus PCC 7942菌株。
3.如权利要求1所述的细菌基因编辑方法，其特征在于，所述pHR_trc模板质粒用以作为一同源互换的模板。
4.如权利要求1所述的细菌基因编辑方法，其特征在于，所述pHR_trc模板质粒上含有：一抵抗抗生素观霉素的基因SpecR、一荧光蛋白EGFP、以及同源互换区域NSIa和NSIb。
5.如权利要求1所述的细菌基因编辑方法，其特征在于，所述pCas9-NSI质粒用以正确地结合到一预定位置并进行基因重组作用。
6.如权利要求1所述的细菌基因编辑方法，其特征在于，所述预定位置为一双股断裂位置。
7.如权利要求1所述的细菌基因编辑方法，其特征在于，将所述pHR_trc模板质粒和所述pCas9-NSI质粒送入所述菌体的方法为细菌自然吞噬法。
8.如权利要求4所述的细菌基因编辑方法，其特征在于，所述培养基为含有观霉素的BG-11培养基。
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