[发明专利]一种EV71-VP1手足口病多肽疫苗及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种EV71-VP1手足口病多肽疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤（1），从手足口患者体内分离得到EV71病毒，并对其进行了全基因组测序分析，成功得到的EV71病毒VP1结构蛋白，将其氨基酸分成20组，每组15个氨基酸，加上下游的5个氨基酸，每组20个氨基酸的多肽，最后一组为12个氨基酸，直接合成多肽片段,片段序列如SEQID NO.1-20所示；

步骤（2），通过收集临床具有代表性的手足口康复患儿的血清，采用人肠道病毒EV71型IgG ELISA试剂盒进行检测血清抗体浓度，筛选出含EV71病毒抗体血清即目标一抗，进一步合成多肽包被ELISA板，加入目标一抗，多肽抗原与一抗免疫反应基础上继续加入兔抗人的二抗IgG，通过酶联免疫吸附分析免疫反应，初步筛选出具有较高免疫效果的多肽；

步骤（3），为进一步验证上述初步筛选的多肽是否在体内依然具有免疫效果，构建免疫小鼠模型，并对其进行病理切片HE染色法病理分析，结果表明多肽氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2和SEQ ID NO .8对模型免疫小鼠的免疫效应均具有显著意义，而多肽氨基酸序列如序列表 SEQ ID NO.4免疫效果不明显，筛选出的 SEQ ID NO.2和SEQ ID NO .8所示多肽，即为多肽疫苗。

2.一种EV71-VP1手足口病多肽疫苗，其特征在于,所述多肽由权利要求1所述制备方法制得。

3.如权利要求2所述EV71-VP1手足口病多肽疫苗，其特征在于，步骤（2）中酶联免疫吸附测定优选的具有免疫效果的多肽氨基酸序列如序列表中 SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.4和SEQ ID NO .8。

4.如权利要求2所述EV71-VP1手足口病多肽疫苗，其特征在于，步骤（3）中病理检测进一步验证最终优选的具有免疫效果的多肽氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.2和SEQ IDNO .8。

5.如权利要求4所述EV71-VP1手足口病多肽疫苗，其特征在于，步骤（3）中优选的多肽氨基酸序列SEQ ID NO.8对模型免疫小鼠的小肠、骨骼肌和大脑均具有较高的免疫效果。

6.如权利要求4所述EV71-VP1手足口病多肽疫苗，其特征在于，步骤（3）中优选的多肽氨基酸序列SEQ ID NO.2对模型免疫小鼠的骨骼肌具有较高的免疫效果。

7.权利要求2-6任意项所述EV71-VP1手足口病多肽疫苗在制备预防手足口病的药物中的应用。