[发明专利]一种基于SPR技术的吗啡检测方法

权利要求书

1.一种基于SPR技术的吗啡检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

步骤(1)：将SPR芯片放置到SPR仪器中作为传感芯片，

步骤(2)：以10～30μL/min的流速往SPR芯片表面通入200～300μLEDC/NHS混合液，活化该芯片表面的羧基基团；

步骤(3)：在步骤(2)活化表面羧基后的SPR芯片上以10～30μL/min的流速通入0.5～2mg/mL BSA-Morphine溶液，使其偶联到活化过的羧基上，要求目标响应值(RU)达到2000～3000；

步骤(4)：在步骤(3)BSA-Morphine偶联后的SPR芯片上以10～30μL/min的流速通入75～100μL乙醇胺盐酸盐溶液，用以封闭未反应的活化过的羧基位点；

步骤(5)：在步骤(4)处理后SPR芯片上以10～30μL/min的流速通入30～50μL梯度浓度的吗啡抗体，确定合适的抗体浓度；

步骤(6)：将一系列不同浓度的30～50μL的吗啡标准品分别与步骤(5)确定的浓度抗体混合后，以10～30μL/min的流速依次通入SPR芯片，建立标准曲线；其中吗啡抗原与步骤(5)确定的浓度抗体等体积；

步骤(7)：将30～50μL的待检测样品与步骤(5)确定的浓度抗体等体积混合后，以10～30μL/min的流速通入SPR芯片，记录响应信号，代入标准曲线，求得唾液中吗啡含量。

2.如权利要求1所述的一种基于SPR技术的吗啡检测方法，其特征在于步骤(1)所述的SPR芯片是先在玻璃基底上镀一层2～3nm厚的铬层，再镀一层40～50nm厚的金膜；金膜表面生成巯基烷醇后用环氧氯丙烷处理生成环氧基，环氧基共价结合葡聚糖后用溴乙酸处理使葡聚糖羧基化，从而得到羧基化的葡聚糖表面。

3.如权利要求1所述的一种基于SPR技术的吗啡检测方法，其特征在于步骤(1)SPR仪器温度设定为20～30℃。

4.如权利要求1所述的一种基于SPR技术的吗啡检测方法，其特征在于步骤(2)所述的EDC/NHS混合液为EDC与NHS的等体积混合溶液；其中EDC为N-(3-二甲基氨丙基)-N’-乙基碳二亚胺，浓度为0.2～0.4M；NHS为N-羟基琥珀酰亚胺，浓度为0.1～0.2M。

5.如权利要求1所述的一种基于SPR技术的吗啡检测方法，其特征在于步骤(3)所述的BSA-Morphine为人工合成的吗啡完全抗原，即在BSA(牛血清白蛋白)表面偶联了Morphine(吗啡)分子；pH值为4.5～5.5。

6.如权利要求1所述的一种基于SPR技术的吗啡检测方法，其特征在于步骤(4)所述的乙醇胺盐酸盐溶液的浓度为1～2M。

7.如权利要求1所述的一种基于SPR技术的吗啡检测方法，其特征在于步骤(5)所述的吗啡抗体为对BSA-Morphine具有特异性识别的鼠源单克隆抗体。

8.如权利要求1所述的一种基于SPR技术的吗啡检测方法，其特征在于步骤(5)中每个吗啡抗体反应完成后以10～30μL/min的流速通入甘氨酸溶液，使抗原抗体解离，完成芯片再生后再加入下一个浓度的抗体；所述的甘氨酸溶液为ph＝1.5。

9.如权利要求1所述的一种基于SPR技术的吗啡检测方法，其特征在于步骤(7)中的待测样品可以是唾液，血液，尿液。

10.如权利要求1所述的一种基于SPR技术的吗啡检测方法，其特征在于吗啡的最低检测灵敏度在3.91-7.81ng/ml。