[发明专利]一种抗IL-4R单链抗体与蛇毒L-氨基酸氧化酶融合蛋白及应用

说明书

本发明公开了一种抗IL‑4R单链抗体与蛇毒L‑氨基酸氧化酶融合蛋白，所述融合蛋白这样制备：通过重叠延伸PCR技术方法将抗IL‑4R单链抗体与竹叶青蛇毒LAAO基因连接成scFv‑LAAO融合基因，构建重组质粒pET28a‑scFv‑LAAO，转入BL21(DE3)原核表达菌，诱导表达scFv‑LAAO融合蛋白，即得。本发明采用分子生物学技术抗IL‑4R单链抗体基因(scFv)与蛇毒L‑氨基酸氧化酶融合基因的表达载体，在体外进行体外表达，重组抗IL‑4R单链抗体与蛇毒L‑氨基酸氧化酶融合蛋白，所述抗IL‑4R单链抗体与蛇毒L‑氨基酸氧化酶融合蛋白可用于治疗肺癌，疗效好，基本无副作用。

技术领域

本发明涉及一种抗IL-4R单链抗体与蛇毒L-氨基酸氧化酶融合蛋白及其应用，属于生物技术领域的领域。

技术背景

肺癌是发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，对人类生命和健康有着非常大威胁，是恶性肿瘤死亡的首位原因，其发病率仍呈持续上升趋势。对早期肺癌最有效的治疗方法是手术切除，但因手术后病人出现较高全身和局部的复发率。传统的细胞毒性药物的化疗效果已经达到了一个平台期，其进一步发展的空间极小，而且传统的细胞毒性化疗药物的毒副反应也限制其应用和发展。放射治疗对已发生的原发肿瘤就不再适合。放疗结合化疗可以通过增加肿瘤疗效，但不良反应也相应的增加，从而限制了其临床的应用。

随着分子生物学的进一步发展，分子靶向治疗必然会为肺癌的治疗开辟广阔的应用前景。靶向治疗为肺癌的治疗提供了新的策略。近二十年来，免疫毒素已成为寻找新型抗肿瘤药物一个十分活跃的研究领域。免疫毒素是将生物毒素与抗体或细胞因子连接起来的导向药物，又称作生物导弹或导向毒素。导向药物的概念最早由德国药物化学家PaulErhlich提出，它由两部分组成：能识别并结合肿瘤细胞表面标志物的导向部分和在导向部分的引导下进入细胞并发挥细胞毒作用的效应部分。由于导向性治疗药物可特异性杀伤肿瘤细胞，具有副作用低、高效的特点，因此对一些难治愈和多药耐药的恶性肿瘤尤其有着重要意义。现在FDA已经批准的分子靶向药物如Hereeptin，Rituximab，ZD1839都成功地对那些常规疗法无效的肿瘤患者显现出惊人的疗效。白喉毒素与IL-2重组的免疫毒素也经FDA批准作为人皮肤T细胞淋巴瘤的抢救药物上市，还有很多已呈现出显著的抗肿瘤作用的其它免疫毒素和靶向药物，目前正在进行I/II期临床试验。

利用分子技术和基因技术进行肿瘤的免疫治疗的研究也日益增多，其中一些针对肺癌分子的靶向药物己经在临床前研究和临床应用上显示出一定抗癌活性。如针对表皮生长因子受体，蛋白激酶C，血管内皮生长因子，环氧化酶-2，法尼基转移酶等调节转录的启动和与转录因子发生相互作用，参与肿瘤的发生、发展和转移有关的靶目标都可能作为肺癌治疗的分子靶向目标。

以往的研究已经证实IL-4R也表达于许多正常的造血细胞和非造血细胞。Puri等报道了IL4-PE(PE:假单胞杆菌外毒素)对T细胞、B细胞和CD34+前体细胞等静止性的造血细胞仅有很小的敏感性，因为这些细胞表达的IL-4R水平很低。IL4-PE对高水平表达的IL-4R的成纤维细胞、内皮细胞等非造血细胞没有表现出明显的毒性反应，与同样高表达IL-4R的肿瘤细胞相反。他们通过毒理学研究，当IL4-PE静脉注射断尾猴(其体内细胞可以与人IL-4R结合)，只有在非常大的剂量时(200μg/kg)才会对肝脏产生毒性反应，而对其它器官及血液系统不会产生毒性反应。这些研究成果表明IL-4R有高度的肿瘤细胞表达特异性，具备作为免疫毒素作用靶点的要求，其配体或抗体易于获得、便于实验，作为免疫毒素的载体它们无需人源化改造。