[发明专利]一种结肠宁制剂的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于药物检测技术领域，特别涉及测定结肠宁制剂中蒲黄的次生代谢产物含量。

背景技术

结肠宁制剂具有活血化瘀，清肠止泻的功效，是治疗慢性结肠炎、结肠炎、溃疡性结肠炎、细菌性痢疾的特色灌肠剂。自问市以来，其质量标准一直在提升。结肠宁制剂是由蒲黄和丁香蓼两味药组成的处方制剂，目前企业内部标准主要是对其蒲黄、丁香蓼的定性鉴别以及丁香蓼中没食子酸的定量鉴别；然而处方中，蒲黄用量是丁香蓼的数倍，作为用料最多的原料，其定量方法一直是结肠宁制剂检测的重点难题。

发明内容

本发明目的针对结肠宁制剂目前对于蒲黄的含量控制的合适方法的缺失而开发的检测方法。此方法包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备：

称取异鼠李素对照品，置于容量瓶中，加25％～75％乙醇或甲醇，超声溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：

结肠宁供试品溶液的制备：取结肠宁样品置于容量瓶中，精密称定，加25％～75％乙醇或甲醇，超声30～90min，冷却至室温，定容至刻度，过滤；精密量取续滤液蒸干，加水溶解转移至100ml三角锥形瓶中，加1ml盐酸；置于水浴锅中加热回流30～60min，冷却至室温后以水饱合正丁醇或氯仿或乙酸乙酯萃取；将萃取液蒸干后转移定容至容量瓶中，即得。

(3)HPLC检测：

分别吸取步骤(1)和(2)所得的异鼠李素对照品溶液和结肠宁制剂供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪中进行测定；

其中，色谱条件为：色谱柱为C₁₈反相色谱柱；紫外检测器；柱温为30～35℃；检测波长为350～370nm；流动相A为乙腈，流动相B为0.1～1％磷酸溶液，流速为0.8～1.2ml/min；分析时间30分钟；等度洗脱，流动相A:流动相B的体积比＝45～55:55～45。

所述步骤(1)供试品溶液的制备优选为下述方法进行：

称取异鼠李素对照品5mg置于容量瓶中，加25～75％乙醇或甲醇，超声溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液。

所述步骤(2)供试品溶液的制备优选为下述方法进行：

取结肠宁样品约1～5g置于50ml容量瓶中，精密称定，加30～70％甲醇或乙醇45mL，超声30～90min，冷却至室温，定容至50ml，过滤；精密量取续滤液10～30ml蒸干，加水20ml溶解转移至100ml三角锥形瓶中，加1ml盐酸；置于水浴锅中加热回流30～90min，冷却至室温后以水饱合正丁醇萃取1～5次，每次10～30ml；将萃取液蒸干后转移定容至10ml容量瓶，即得。

所述步骤(3)中的色谱柱优选柱长为250mm的C₁₈反相色谱柱。

所述步骤(3)中检测波长优选为370nm。

所述步骤(3)中流动相B优选为1％磷酸溶液。

所述步骤(3)中流速优选为1ml/min。

所述步骤(1)和(2)中乙醇或甲醇浓度优选为50％。

所述步骤(3)中流动相A:流动相B的体积比优选为53:47。

所述步骤(2)中超声处理时间优选为30分钟。

所述步骤(2)中回流时间为60分钟。

所述步骤(2)中以水饱合正丁醇萃取。

为更好的表明本发明的实质，将本发明的方法学考察详述如下：

1仪器与试药

仪器：Waters e2695-2998型高效液相色谱仪，AR220分析天平，BS2202D天平、CP225D天平、KQ300DE型数控超声波清洗器、Kromasil 100-5 C18(250mm×4.6mm,5μm)、Inertsil ODS-2 C18(250mm×4.6mm,5μm)、Hypersil ODS2 C18(250mm×4.6mm,5μm)、DZKW型电热恒温水浴锅等。

试药：结肠宁(5g/支，批号为20150401、20150402、20150403，由九芝堂股份有限公司提供)；异鼠李素(110860-201109，中国食品药品检定研究院)。

试剂：甲醇(AR/色谱纯)、乙醇(AR)、冰醋酸(AR)、磷酸(AR)、乙腈(色谱纯)，水为超纯水。

2方法与结果

2.1检测波长的选择、流动相、提取方式、提取溶剂、提取时间、萃取溶剂的选择。

采用SPD-M20A检测器对样品进行了全波长扫描(见附图1)，选择370nm为检测波长。