[发明专利]一种水牛角的检测方法

权利要求书

1.一种水牛角的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括采用高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)进行水牛角检测的步骤，其中，以水牛角对照药材为对照品，以m/z459.7±0.5(双电荷)→391.9±0.5(单电荷)和m/z459.7±0.5(双电荷)→505.1±0.5(单电荷)作为检测离子对。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的条件为：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶，流动相A选自甲酸、乙酸、甲酸水溶液或乙酸水溶液中的至少一种，优选自0.1％(v/v)甲酸的水溶液或0.1％(v/v)乙酸的水溶液；流动相B选自乙腈、甲醇或甲酸的乙腈溶液中的至少一种，优选为0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液，进行梯度洗脱；

优选地，所述高效液相色谱的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以0.1％(v/v)甲酸的水溶液为流动相A，以0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液为流动相B，梯度洗脱：0～25分钟，A 95％→80％，B 5％→20％；25～40分钟，A 80％→50％，B 20％→50％；40～41分钟，A 50％→1％，B 50％→99％；41～45分钟，A 1％→1％，B 99％→99％。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述质谱采用质谱检测器，电喷雾正离子模式(ESI⁺)，进行多反应监测。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括将所述水牛角进行酶解的步骤；优选地，所述酶解包括向水牛角中依次加入尿素，二硫苏糖醇(DTT)，碘乙酰胺(IAA)和酶的步骤；更优选地，所述酶解包括如下步骤：向水牛角中加入尿素，再加入DTT，60±5℃加热30±5min，冷却，加入IAA，黑暗中放置30±5min，加碱稀释至10ml，加酶于37℃反应12h以上。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述酶选自胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的至少一种，优选胰蛋白酶。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述碱为碳酸氢铵(NH₄HCO₃)。