[发明专利]一种杀虫蛋白及其核酸、制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种杀虫蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的至少一种。这些蛋白质具有一致的杀虫谱，均对大猿叶甲、小猿叶甲、黄曲条跳甲、榆蓝叶甲和马铃薯甲虫等鞘翅目害虫具有良好的杀虫活性，特别是氨基酸序列如SEQ ID No.4所示的蛋白的杀虫效果尤为突出。

技术领域

本发明涉及杀虫蛋白领域。

背景技术

鞘翅目害虫在我国农业生产中的危害逐年加重，且造成了严重的经济损失，因此，急需发掘更多的对鞘翅目害虫具有毒杀作用的菌株及基因。目前，从苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)中发现了一些的Cry蛋白对鞘翅目害虫具有杀虫活性。然而，为了丰富生物防治的种类，特别是蛋白对鞘翅目害虫防治的种类，以期获得具有不同杀虫机理的生物防治材料，来应对因长期使用某单一药剂可能产生的抗药性。因此，仍然有必要寻找新的具有优良活性的新型杀虫蛋白。

发明内容

本发明之一提供了一种不同于现有技术的新型的杀虫蛋白，其氨基酸序列为如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的至少一种。根据本发明的发现，这些蛋白质具有一致的杀虫谱，例如它们均对大猿叶甲、小猿叶甲、黄曲条跳甲、榆蓝叶甲和马铃薯甲虫等鞘翅目害虫具有良好的杀虫活性，特别是氨基酸序列如SEQ ID No.4所示的蛋白的杀虫效果尤为突出。

在一个具体实施方式中，所述杀虫蛋白为氨基酸序列如SEQ ID No.1、SEQ IDNo.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的至少一种的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或多个氨基酸，且与氨基酸序列如SEQ ID No.1、SEQID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的蛋白中的至少一种具有相同功能的蛋白。

发明人在研究过程中，对其中对鞘翅目害虫杀虫活性突出的蛋白(如SEQ ID No.4所示)进行了一系列的截短，以期提高该序列的活性。最后，经实验证实，氨基酸序列如SEQID No.7所示的截短蛋白获得了较野生型序列(如SEQ ID No.4所示)更优的杀虫效果。因此，在一个优选的具体实施方式中，所述杀虫蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示。

本发明之二提供了一种能够翻译为本发明之一的杀虫蛋白的核酸。

在一个具体实施方式中，能够翻译为如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列的核酸的序列如SEQ ID No.8所示，能够翻译为如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的核酸的序列如SEQ ID No.9所示，能够翻译为如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列的核酸的序列如SEQ IDNo.10所示，能够翻译为如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的核酸的序列如SEQ ID No.11所示，能够翻译为如SEQ ID No.5所示的氨基酸序列的核酸的序列如SEQ ID No.12所示，能够翻译为如SEQ ID No.6所示的氨基酸序列的核酸的序列如SEQ ID No.13所示，能够翻译为如SEQ ID No.7所示的氨基酸序列的核酸的序列如SEQ ID No.14所示。

本发明之三提供了一种制备杀虫晶体蛋白的方法，其包括如下步骤：在活体生物中表达本发明之一的杀虫蛋白；特别是在含有本发明之二的核酸的活体生物中表达本发明之一的杀虫蛋白。本领域的技术人员熟知每一个三联体密码相对应于一种氨基酸编码，而一种氨基酸则有可能相对应于多个三联体密码，因此，在氨基酸序列一定的情况下，可以存在与其对应的多种DNA序列。

在一个具体实施方式中，所述活体生物在16-20℃下表达所述杀虫蛋白。