[发明专利]一种中草药黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选新方法

权利要求书

1.一种中草药黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选新方法，其特征在于：基于黄嘌呤氧化酶催化反应过程中的电子转移信号及碳纳米材料信号放大功能筛选中草药黄嘌呤氧化酶抑制剂。

2.如权利要求1所述的一种中草药黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选方法，其特征在于：按如下步骤制备：

(1)先将碳纳米材料修饰到电极表面，再将黄嘌呤氧化酶修饰到碳纳米材料修饰的电极表面；或将碳纳米材料与黄嘌呤氧化酶一起修饰到电极表面；

(2)修饰电极干燥后在通氮除氧的缓冲溶液中，采用电化学方法测定修饰电极对黄嘌呤的响应；

(3)基于黄嘌呤的信号变化筛选中草药黄嘌呤氧化酶抑制剂。

3.如权利要求2所述的一种中草药黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选方法，其特征在于：按如下步骤制备：

(1)将碳纳米材料用浓硫酸与浓硝酸进行超声处理，洗涤干燥后用水分散，再将碳纳米材料修饰到电极表面，之后干燥，将黄嘌呤氧化酶用水分散，再修饰到经碳纳米材料修饰后的电极表面；或将碳纳米材料与黄嘌呤氧化酶配成溶液一起修饰到电极表面，之后干燥，得到修饰后的电极；

(2)将步骤(1)得到的修饰后的电极放入通氮除氧的缓冲溶液中，加入黄嘌呤，静置吸附5分钟，采用电化学方法测定修饰电极对黄嘌呤的响应；

(3)将修饰电极冲洗干净后放入另一通氮除氧的缓冲溶液中，加入中草药化学成分，静置吸附5分钟，再加入黄嘌呤，静置吸附5分钟，采用电化学方法测定修饰电极对黄嘌呤的响应；

(4)同时，分别测定(2)、(3)中不加黄嘌呤与中草药化学成分时各实验的电化学背景信号；

(5)加入不同量的中草药化学成分，重复(3)、(4)操作；

(6)根据公式筛选中草药黄嘌呤氧化酶抑制剂：计算化学成分对黄嘌呤氧化酶的抑制活性：其中ΔI₀是不加样品的峰电流与其背景的电流差，ΔI₁是加样品的峰电流与其背景的电流差。

4.如权利要求3所述的一种中草药黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将碳纳米材料用浓硫酸与浓硝酸组成的混合酸超声处理2～10h，混合酸中浓硫酸与浓硝酸的体积比为3：1，然后将碳纳米材料用水洗涤至pH呈中性后过滤，干燥；精密称取已处理好的碳纳米材料10mg，用蒸馏水配成浓度为1.0mg/mL的碳纳米材料溶液，超声3h分散，并取4μL碳纳米材料溶液饰到电极表面，之后干燥；

(2)将黄嘌呤氧化酶用蒸馏水分散至浓度为0.17U/μL，取2μL黄嘌呤氧化酶溶液修饰到步骤(1)中的经碳纳米材料修饰后的电极表面；或将碳纳米材料和浓度为0.17U/μL的黄嘌呤氧化酶溶液以等体积比混合配成溶液，取6μL该溶液一起修饰到电极表面，之后干燥；

(3)修饰电极干燥后置于5mL通氮除氧的的磷酸缓冲溶液(PBS,1/15mol/L，pH＝5.3)中，加入质量浓度为14.0μg/μL的黄嘌呤溶液10μL，静置吸附5分钟，采用电化学方法如循环伏安法或计时电流法测定修饰电极对黄嘌呤的响应；

(4)之后，再将修饰电极冲洗干净后置于另一体积为5mL的通氮除氧的磷酸缓冲溶液(PBS,1/15mol/L，pH＝5.3)中，加入6μL质量浓度为3mg/mL的中草药化学成分溶液，即中草药化学成分的最终浓度为3.6μg/mL，静置吸附5分钟，再加入黄嘌呤10μL，静置吸附5分钟，采用电化学方法如循环伏安法或计时电流法测定修饰电极对黄嘌呤的响应；

(5)同时，分别测定(3)、(4)中不加黄嘌呤与中草药化学成分溶液时各实验的电化学背景信号；

(6)加入不同量(12、18、24μL)的质量浓度为3mg/mL的中草药化学成分溶液，重复(4)、(5)操作；

(7)根据公式筛选中草药XOD抑制剂：计算化学成分对XOD的抑制活性：其中ΔI₀是不加样品的峰电流与其背景的电流差，ΔI₁是加样品的峰电流与其背景的电流差。

5.如权利要求4所述的一种中草药黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选方法，其特征在于：步骤(1)所述的碳纳米材料为碳纳米管或石墨烯，还可用碳纳米管或石墨烯与壳聚糖、聚苯胺等高分子材料的混合物代替碳纳米材料。