[发明专利]一种狭叶红景天种苗的快速培育方法

权利要求书

1.一种狭叶红景天种苗的快速培育方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)外植体的获得

a.选取已成熟的狭叶红景天种子，将其消毒处理后接入MS+酵母提取物50～100mg·L^-1培养基中，在每天光照10～14小时、光照强度为700～1200lx和每天在5～8℃和20～25℃各培养12小时的条件下进行种子的萌发生长培养；

b.取已萌发的狭叶红景天种子，转接入MS+川荞一号种子50～100g·L^-1培养基中，在培养温度为15～25℃、每天光照8～12小时、光照强度为1500～2000lx的条件下培养20天后，选取直径在1mm以上、长度为0.5～1.5cm的子叶柄作为外植体；

(2)胚性组织细胞的培养：将子叶柄外植体靠近胚轴端部分插入到培养基B₅+2,4-D 1.0～3.0mg·L^-1+NAA 0.1～0.5mg·L^-1+酵母多糖80～200mg·L^-1中，在培养温度为12～28℃、每天光照10～18小时、光照强度为1000～1500lx的条件下培养15～25天后，插入培养基中的子叶柄产生胚性组织细胞；

(3)胚状体的产生：切取步骤(2)中产生的胚性组织细胞，以50～100g·L^-1的接种量接入液体培养基1/2MS+TDZ1.0～3.0mg·L^-1+NAA0.5～2.0mg·L^-1+酵母提取物100～300mg·L^-1中，在摇床转速为80～100r·min^-1、培养温度18～25℃、每天光照8～16小时和光照强度为1000～2000lx的条件下培养15～20天后，再转入1/2MS+6BA1～3.0mg·L^-1+NAA0.5～2mg·L^-1+酵母多糖200～400mg·L^-1固体培养基中进行培养，培养温度和光照条件与液体培养基中培养相同，培养25～35天后在胚性组织细胞表面产生胚状体；

(4)种苗的获得：将步骤(3)中产生的胚状体切割后接入1/2MS培养基中，在培养温度为18～30℃、每天光照12～24小时和光照强度为1800～3000lx的条件下培养30～45天，即获得生长健壮的狭叶红景天种苗；

上述所有培养基的蔗糖20～40g·L^-1、pH值为5.8～6.6、琼脂为5～6.5g·L^-1。

2.根据权利要求1所述的狭叶红景天种苗的快速培育方法，其特征在于：步骤(1)a中所述消毒处理是指将狭叶红景天种子放入0.1％的升汞溶液中消毒3～7分钟后，再用无菌水清洗3～6分钟，所述种子与升汞溶液的体积比为1：20。

3.根据权利要求1所述的狭叶红景天种苗的快速培育方法，其特征在于：步骤(2)中子叶柄外植体插入培养基部分占整个子叶柄外植体的1/3。

4.根据权利要求1所述的狭叶红景天种苗的快速培育方法，其特征在于：步骤(3)中所述胚性组织细胞为分裂能力强、颜色为黄绿色的胚性组织细胞。

5.根据权利要求1所述的狭叶红景天种苗的快速培育方法，其特征在于：步骤(4)中胚状体按2～3个为1组进行切割。