[发明专利]双泡状荧光探针及其应用和试剂盒

权利要求书

1.一种双泡状荧光探针，其特征在于：所述荧光探针从5'-端至3'-端依次包括锚定序列区Ⅰ，泡状结构Ⅰ、识别序列区、泡状结构Ⅱ和锚定序列区Ⅱ，所述锚定序列区Ⅰ和锚定序列区Ⅱ特异结合靶序列，所述识别序列区与靶序列检测位点杂交，所述泡状结构Ⅰ和泡状结构Ⅱ分别标记有相互作用性的荧光标记系统，且与靶序列杂交形成泡状结构。

2.根据权利要求1所述双泡状荧光探针，其特征在于：所述泡状结构Ⅰ或泡状结构Ⅱ含有至少一个错配碱基或核苷酸衍生物。

3.根据权利要求1所述的一种双泡状荧光探针，其特征在于：所述锚定序列区Ⅰ或锚定序列区Ⅱ的核苷酸长度为8~50nt。

4.根据权利要求1所述的一种双泡状荧光探针，其特征在于：所述锚定序列区Ⅰ或锚定序列区Ⅱ的GC含量为25~75%。

5.根据权利要求1所述的一种双泡状荧光探针，其特征在于：所述泡状结构Ⅰ或泡状结构Ⅱ的核苷酸长度为1~12nt。

6.根据权利要求1所述的一种双泡状荧光探针，其特征在于：所述识别序列区序列的核苷酸长度为1~3nt。

7.根据权利要求1所述的一种双泡状荧光探针，其特征在于：所述3'-端还包括延伸阻断基团。

8.根据权利要求7所述的一种双泡状荧光探针，其特征在于：所述阻断基团是在锚定序列区的3'-末端碱基修饰磷酸基团、氨基基团，或者在锚定序列区的3'-末端使用反转碱基或双脱氧核苷酸。

9.根据权利要求2所述的一种双泡状荧光探针，其特征在于：所述核苷酸衍生物为脱氧肌苷、肌苷、7-去氮-2’-脱氧肌苷、2-氮杂-2’-脱氧肌苷、2’-甲氧基肌苷、2’-F肌苷、脱氧3-硝基吡咯、3-硝基吡咯、2’-甲氧基3-硝基吡咯、2’-F3-硝基吡咯、1-(2’-脱氧-β-D-呋喃核糖)-3-硝基吡咯、脱氧5-硝基吡咯、5-硝基吲哚、2’-甲氧基5-硝基吲哚、2’-F5-硝基吲哚、脱氧4-硝基苯并咪唑、4-硝基苯并咪唑、脱氧4-氨基苯并咪唑、4-氨基苯并咪唑、脱氧水粉蕈素、2’-F 水粉蕈素、2’-F 4-硝基苯并咪唑、肽核酸-5-硝基吲哚、肽核酸-水粉蕈素、肽核酸-肌苷、肽核酸-4-硝基苯并咪唑、肽核酸-3- 硝基吡咯、吗啉基-5硝基吲哚、吗啉基-水粉蕈素、吗啉基-肌苷、吗啉基-4-硝基苯并咪唑、吗啉基-3- 硝基吡咯、氨基磷酸酯-5-硝基吲哚、氨基磷酸酯-水粉蕈素、氨基磷酸酯- 肌苷、氨基磷酸酯-4-硝基苯并咪唑、氨基磷酸酯-3-硝基吡咯、2’-0-甲氧基乙基肌苷、2’-0-甲氧基乙基水粉蕈素、2’-0-甲氧基乙基5- 硝基吲哚、2’-0-甲氧基乙基4- 硝基-苯并咪唑和2’-0-甲氧基乙基3-硝基吡咯中的一种或几种。

10.根据权利要求2所述一种双泡状荧光探针，其特征在于：所述错配碱基为GA、CT、TT、CC、AA、GG、CA和GT错配。

11.根据权利要求10所述一种双泡状荧光探针，其特征在于：所述错配碱基为GA、CT、TT错配。

12.根据权利要求1所述一种双泡状荧光探针，其特征在于：所述相互作用性的荧光标记系统由荧光报告基团或淬灭基团组成。

13.根据权利要求11所述一种双泡状荧光探针，其特征在于：所述相互作用性的荧光标记系统是在泡状结构Ⅰ标记荧光报告基团，泡状结构Ⅱ标记淬灭基团，或在泡状结构Ⅰ标记淬灭基团，泡状结构Ⅱ标记荧光报告基团。