[发明专利]一种建库方法及SNP分型方法

说明书

本发明提供了一种建库方法，包括：PCR扩增待测序样本，得到扩增产物；在扩增产物上连接接头一，得到含有IIS型限制性内切酶识别序列以及IIS型限制性内切酶切割位点的连接产物，接头一为双链核酸分子，IIS型限制性内切酶切割位点与待测SNP位点之间的距离为0至5个碱基；采用IIS型限制性内切酶对连接产物进行酶切，得到含有待测SNP位点和接头一的第一核酸片段，第一核酸片段上经酶切形成第一末端；在第一核酸片段的第一末端处连接接头二，得到文库分子，接头二为含有测序引物结合位点的双链核酸分子。本发明还提供了一种SNP分型方法及检测SNP位点突变的试剂盒。本发明缩短了位点检测时间，提高了检测准确性，且统一了同一体系中进行多个位点检测的测序引物。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，更具体地说，涉及一种建库方法及SNP分型方法。

背景技术

单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism，SNP）是指基因组上单个核苷酸位置上存在转换、颠换、插入、缺失等变化，其数量很多，多态性丰富。SNP被认为是遗传标志，人体许多表型差异、对药物或疾病的易感性等等都可能与SNP有关，因此SNP的分型对诸多疾病的治疗和用药有着积极的意义。

针对基因检测，二代高通量测序技术因其准确、灵敏的特性，应用范围不断扩大，已涉及生命科学研究以及医学研究的各个不同方面，利用二代高通量测序技术来进行SNP位点的检测也是目前的研究热点之一。但是，基于二代高通量测序技术的SNP分型方法，当待测SNP位点与测序引物末端之间距离较长时，检测时间会大大延长，且受限于测序方法的读长，检测的准确性会大大降低；此外，当同时对多个易感基因的多个SNP位点检测时，通常需要针对不同待测SNP位点附近的序列设计多种不同的测序引物，但不同测序引物之间容易产生相互干扰，测序引物难以准确锚定在特定位置，从而增加了测序引物的设计难度，可能降低SNP分型检测的准确率。

因此，需要一种新的建库方法及SNP分型方法，使得对待测SNP位点检测的准确性不受测序读长的影响；且能够避免在同一体系中同时对多个待测SNP位点进行检测时，不同测序引物之间相互干扰的现象。

发明内容

本发明的目的在于提供一种建库方法及SNP分型方法，旨在解决现有技术中SNP分型准确性受测序读长影响，以及在同一体系中同时对多个SNP位点检测时不同测序引物之间相互干扰的问题。

为了实现发明目的，本发明提供了一种建库方法，包括以下步骤：

A、PCR扩增含待测SNP位点的待测序样本，得到扩增产物；

B、在所述扩增产物上连接接头一，得到含有IIS型限制性内切酶识别序列以及IIS型限制性内切酶切割位点的连接产物，所述接头一为双链核酸分子，所述IIS型限制性内切酶切割位点与所述待测SNP位点之间的距离为0至5个碱基；

C、采用IIS型限制性内切酶对连接产物进行酶切，得到含有待测SNP位点和接头一的第一核酸片段，且所述第一核酸片段上经酶切形成第一末端；

D、在第一核酸片段在第一末端处连接接头二，得到文库分子，所述接头二为含有测序引物结合位点的双链核酸分子。

优选的，所述IIS型限制性内切酶识别序列位于所述PCR扩增引物组中的至少一种扩增引物上，并通过PCR扩增引入至连接产物上。

优选的，所述IIS型限制性内切酶识别序列位于所述接头一上，并通过连接反应引入至连接产物上。

优选的，所述PCR扩增所用的引物组中，有少一种扩增引物上含有可断裂位点或可切除序列；所述步骤B包括以下步骤：

B1.利用断裂剂切割所述扩增产物，所述断裂剂用于对扩增产物中的可断裂位点或可切除序列进行特异性切割，形成第二末端；