[发明专利]一种建库方法及SNP分型方法

权利要求书

1.一种建库方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、PCR扩增含待测SNP位点的待测序样本，得到扩增产物；

B、在所述扩增产物上连接接头一，得到含有IIS型限制性内切酶识别序列以及IIS型限制性内切酶切割位点的连接产物，所述接头一为双链核酸分子，所述IIS型限制性内切酶切割位点与所述待测SNP位点之间的距离为0至5个碱基；

C、采用IIS型限制性内切酶对连接产物进行酶切，得到含有待测SNP位点和接头一的第一核酸片段，且所述第一核酸片段上经酶切形成第一末端；

D、在第一核酸片段的第一末端处连接接头二，得到文库分子，所述接头二为含有测序引物结合位点的双链核酸分子。

2.根据权利要求1所述的建库方法，其特征在于，所述IIS型限制性内切酶识别序列位于所述PCR扩增引物组中的至少一种扩增引物上，并通过PCR扩增引入至连接产物上。

3.根据权利要求1所述的建库方法，其特征在于，所述IIS型限制性内切酶识别序列位于所述接头一上，并通过连接反应引入至连接产物上。

4.根据权利要求1所述的建库方法，其特征在于，所述PCR扩增所用的引物组中，有至少一种扩增引物上含有可断裂位点或可切除序列，所述步骤B包括以下步骤：

B1.利用断裂剂切割所述扩增产物，所述断裂剂用于对扩增产物中的可断裂位点或可切除序列进行特异性切割，形成第二末端；

B2.在所述扩增产物的第二末端处连接接头一，得到含有IIS型限制性内切酶识别序列以及IIS型限制性内切酶切割位点的连接产物，所述接头一为双链核酸分子，所述IIS型限制性内切酶切割位点与所述待测SNP位点之间的距离为0至5个碱基。

5.一种SNP分型方法，其特征在于，包括对按权利要求1至6中任一项所述的建库方法制得的文库分子进行测序的步骤。

6.根据权利要求5所述的SNP分型方法，其特征在于，所述方法还包括将文库分子可寻址的固定在固相载体上的步骤。

7.根据权利要求5所述的SNP分型方法，其特征在于，当检测的待检测序样本有多个时，根据待测序样本的不同分别进行建库，获得多种文库分子，再将多种文库分子混合后进行测序。

8.一种用于检测多种SNP位点突变的试剂盒，所述试剂盒包括扩增引物组和/或接头一；所述扩增引物组用于对所述多种SNP位点中的至少一种SNP位点进行特异性扩增，所述接头一为双链核酸分子，用于与含待测SNP位点的待测序样本的扩增产物连接；其特征在于，所述扩增引物组中的至少一种扩增引物上或接头一上含有IIS型限制性内切酶识别序列，使得产生的IIS型限制性内切酶切割位点与待测SNP位点之间的距离为0至5个碱基。