[发明专利]甲氧基荧光素衍生物及其制备方法以及羧肽酶Y检测方法和检测试剂盒

权利要求书

1.一种甲氧基荧光素衍生物，该甲氧基荧光素衍生物具有式(1)所示的结构，其中，R为叔丁基；

2.权利要求1所述的甲氧基荧光素衍生物的制备方法，该方法包括：在亲核反应条件和缚酸剂存在下，在有机溶剂中，将式(2)所示结构化合物与酰氯或酸酐中的一种接触；

其中，所述酰氯的通式为R’-C(＝O)Cl，R’与R具有相同的选择；

所述酸酐的通式为R”-C(＝O)-O-(O＝C)-R”，R”与R具有相同的选择。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其中，相对于1毫摩尔的式(2)所示结构化合物，所述酰氯或酸酐的用量为1-2毫摩尔，所述缚酸剂的用量为1-3毫摩尔，所述有机溶剂的用量为20-30毫升。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其中，所述缚酸剂选自三乙胺、二乙胺、二异丙基胺、吡啶、N,N-二甲氨基吡啶、2,6-二甲基吡啶、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠和碳酸氢钠中的至少一种，所述有机溶剂选自二氯甲烷、四氢呋喃、氯仿、四氯化碳、乙腈、丙酮、乙二醇二甲醚、N,N-二甲基甲酰胺和1,2-二氯乙烷中的至少一种。

5.根据权利要求2-4中任意一项所述的制备方法，其中，所述亲核反应的条件包括：温度为零下5℃至30℃，时间为10-120min。

6.权利要求1所述的甲氧基荧光素衍生物在检测羧肽酶Y的活性中的应用。

7.一种检测羧肽酶Y活性的方法，其特征在于，该方法包括：

将含有羧肽酶Y的待测样品与权利要求1所述的甲氧基荧光素衍生物接触，得到接触后的物料；

检测接触后的物料在激发光下发出的荧光强度随时间的增加值，所述荧光强度的增加值指示了待测样品中羧肽酶Y的活性；所述激发光的波长为410-490nm，所述荧光的发射波长为505-555nm。

8.权利要求7所述的检测方法，其中，相对于10μg/mL的羧肽酶Y，所述甲氧基荧光素衍生物的用量为2-100μM。

9.权利要求8所述的检测方法，其中，相对于10μg/mL的羧肽酶Y，所述甲氧基荧光素衍生物的用量为2-10μM。

10.权利要求7-9中任意一项所述的检测方法，其中，接触的条件包括：温度为25-37℃，pH值为7-9，时间为5-40min。

11.一种羧肽酶Y的活性的检测试剂盒，该检测试剂盒包括：权利要求1所述的甲氧基荧光素衍生物、羧肽酶Y标准品以及反应缓冲液。