[发明专利]一种胶体金免疫层析试纸条及其制备和使用方法

说明书

本发明公开了一种胶体金免疫层析试纸条及其制备和使用方法。该试纸条包括PVC底板、样品垫、金标垫、检测线、控制线、硝基纤维素膜、吸水垫；所述金标垫上包被有胶体金标记的有机磷农药通用抗体和氨基甲酸酯类通用抗体混合物；所述检测线包被有机磷农药通用半抗原与载体蛋白的偶联物，以及氨基甲酸酯类通用半抗原与载体蛋白的偶联物；所述控制线上包被兔抗鼠或羊抗鼠IgG抗体。该试纸条可对大部分有机磷农药和氨基甲酸酯类农药进行检测，灵敏度高，稳定性好，可用于蔬菜、水果等农产品中有机磷农药和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测和初筛。

技术领域

本发明涉及对农药的检测领域，具体涉及一种胶体金免疫层析试纸条及其制备和使用方法。

背景技术

有机磷农药和氨基甲酸酯类农药目前仍在广泛应用，其检出率高、超标量大、对人体的危害大。近年来，由于食用受到有机磷和氨基甲酸酯类农药污染的蔬菜导致急性中毒的事件屡有发生。因此，加大市场监管力度，开发农药残留快速检测技术，是关乎国计民生的大事。

目前，农药残留快速检测技术主要有化学反应法、胆碱酯酶抑制法、发光菌检测法、化学发光技术、生物传感技术、生物芯片技术、免疫分析法等等。其中，利用免疫分析法进行农药残留分析，是一种新兴的农药检测方法。如在有机磷的检测中，将有机磷分子与蛋白质分子结合制成具有抗原性的物质来免疫动物产特异性的抗体，再与相应的抗原结合，发生抗原抗体免疫反应，具有选择性强，灵敏度高的优点。利用免疫分析法开发的酶联免疫试剂盒虽然具有简单、快速、灵敏度高、特异性强等优点，但抗体制备难度大，一般得到的一种抗体只适用于一种农药。

利用宽谱特异性抗体进行有机磷农药多残留检测的研究已有报道，采用通用结构半抗原，与蛋白偶联后制备人工抗原，免疫动物后产生的抗体可同时对几种农药有特异性反应。宽谱特异性抗体的开发为有机磷农药多残留免疫分析提供了条件。但这些研究基本都处于研究阶段，市场上基本没有相应的农药多残留免疫检测产品。

目前，市场上主要的农药检测产品主要采用酶抑制原理，如基于酶抑制比色法原理生产的农药残留速测仪、GB 5009.199-2003中采用的农药残留速测卡等等。但酶抑制法尚存在着批次间差异大、对温度敏感等问题。

发明内容

本发明的目的是针对以上现有技术存在的缺陷，提供一种可同时检测较多种有机磷农药和氨基甲酸酯类农药的胶体金免疫层析试纸条，可用于蔬菜、水果等农产品中有机磷农药和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测和初筛。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种胶体金免疫层析试纸条，该试纸条包括PVC底板、样品垫、金标垫、检测线、控制线、硝基纤维素膜、吸水垫；所述样品垫、金标垫、检测线、控制线、硝基纤维素膜、吸水垫均设置在PVC底板的上方，所述样品垫设置在PVC底板的边缘，金标垫与样品垫部分重叠；金标垫与吸水垫分别与硝基纤维素膜两端部分重叠；硝基纤维素膜上靠近金标垫的一端喷涂有检测线，靠近吸水垫的一端喷涂有控制线；所述样品垫和金标垫为玻璃纤维膜，金标垫上包被有胶体金标记的有机磷农药通用抗体和氨基甲酸酯类通用抗体混合物；所述检测线包被有机磷农药通用半抗原与载体蛋白的偶联物，以及氨基甲酸酯类通用半抗原与载体蛋白的偶联物；所述控制线上包被兔抗鼠或羊抗鼠IgG抗体；所述吸水垫为滤纸；所述有机磷农药通用半抗原(DEPB)如式Ⅰ所示，所述氨基甲酸酯类通用半抗原(EC)如式Ⅱ所示。

本发明所述检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的胶体金免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：

1.制备通用半抗原-载体蛋白偶联物：将有机磷农药通用半抗原或EC与牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)，通过碳二亚胺法，或活化酯法，或混合酸酐法，或重氮化法，或戊二醛法等进行偶联，制备通用半抗原-BSA偶联物与通用半抗原-OVA偶联物；