[发明专利]一种胶体金免疫层析试纸条及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种胶体金免疫层析试纸条，该试纸条包括PVC底板、样品垫、金标垫、检测线、控制线、硝基纤维素膜、吸水垫，其特征在于：所述样品垫、金标垫、检测线、控制线、硝基纤维素膜、吸水垫均设置在PVC底板的上方，所述样品垫设置在PVC底板的边缘，金标垫与样品垫部分重叠；金标垫与吸水垫分别与硝基纤维素膜两端部分重叠；硝基纤维素膜上靠近金标垫的一端喷涂有检测线，靠近吸水垫的一端喷涂有控制线；所述样品垫和金标垫为玻璃纤维膜，金标垫上包被有胶体金标记的有机磷农药通用抗体和氨基甲酸酯类通用抗体混合物；所述检测线包被有机磷农药通用半抗原与载体蛋白的偶联物，以及氨基甲酸酯类通用半抗原与载体蛋白的偶联物；所述控制线上包被兔抗鼠或羊抗鼠IgG抗体；所述吸水垫为滤纸；所述有机磷农药通用半抗原DEPB如式Ⅰ所示，所述氨基甲酸酯类通用半抗原EC如式Ⅱ所示：

2.一种如权利要求1所述的胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)制备通用半抗原-载体蛋白偶联物：将有机磷农药通用半抗原或氨基甲酸酯类通用半抗原与牛血清白蛋白或卵清白蛋白，通过碳二亚胺法，或活化酯法，或混合酸酐法，或重氮化法，或戊二醛法等进行偶联，制备通用半抗原-BSA偶联物与通用半抗原-OVA偶联物；

(2)制备有机磷农药通用抗体和氨基甲酸酯类通用抗体：将通用半抗原-BSA偶联物多次免疫小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞在体外进行融合，制备杂交瘤细胞，将阳性杂交瘤细胞注入小鼠腹腔收集腹水，或以体外细胞培养的收集上清液的方式制备有机磷农药通用抗体和氨基甲酸酯类通用抗体；

(3)制备胶体金：以柠檬酸三钠还原法制备胶体金，胶体金颗粒直径在20～25nm之间；

(4)胶体金标记抗体：将胶体金溶液与有机磷农药通用抗体和氨基甲酸酯类通用抗体按1μg/mL～20μg/mL的比例混匀，通过离心纯化、浓缩，制备成胶体金标记的有机磷农药通用抗体和氨基甲酸酯类通用抗体混合物；

(5)将胶体金标记的有机磷农药通用抗体和氨基甲酸酯类通用抗体混合物喷涂并固定在金标垫上，将DEPB-OVA偶联物和EC-OVA偶联物包被在检测线上，将兔抗鼠IgG抗体或羊抗鼠IgG抗体包被在控制线上，并充分干燥；

(6)将硝基纤维素膜、金标垫、样品垫、吸水垫依次粘合在PVC底板上，切成条状，即制成检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的胶体金免疫层析试纸条。

3.一种如权利要求1所述的胶体金免疫层析试纸条的使用方法，其特征在于：

样品经前处理后，用提取溶剂提取，得到样品溶液，将适量样品溶液滴加到样品垫上，样品溶液将会向右移动，待一段时间后，根据检测线和控制线的显色情况，判断样品中是否含有有机磷农药或氨基甲酸酯类农药，判断方法如下：

(1)检测线显红色，控制线显红色——阴性结果，样品中不含有机磷农药和氨基甲酸酯类农药；

(2)检测线不显红色，控制线显红色——阳性结果，样品中含有有机磷农药或氨基甲酸酯类农药；

(3)无论检测线显不显红色，控制线不显红色——试纸条失效。

4.根据权利要求3所述的胶体金免疫层析试纸条的使用方法，其特征在于：所述提取溶剂为pH＝7的磷酸缓冲盐溶液(PBS)缓冲液。

5.根据权利要求3所述的胶体金免疫层析试纸条的使用方法，其特征在于：所述提取溶剂为含一定比例乙醇的pH＝7的磷酸缓冲盐溶液(PBS)缓冲液。