[发明专利]葡萄酒中酰胺类杀菌剂的固相萃取‑气相色谱‑串联质谱检测方法

权利要求书

1.一种葡萄酒中酰胺类杀菌剂的固相萃取-气相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（一）待测样品的制备：称取4.7-5.3g葡萄酒样品，葡萄酒中加入超纯水，混匀后得到待检液；

（二）待测样品的净化：将固定相萃取柱进行预处理，将步骤（一）制备的待检液上萃取柱，经水和甲醇/水溶液淋洗除去杂质，再用洗脱溶剂洗脱固定相萃取柱上的吲唑磺菌胺、氟啶酰菌胺、硅噻菌胺、啶酰菌胺得到洗脱液，将洗脱液浓缩富集后，用甲醇溶剂稀释并经0.22μm微孔滤膜过滤后得到待测样品溶液；所述固定相萃取柱为Waters Oasis HLB SPE柱，并通过甲醇、水对Waters Oasis HLB SPE柱进行活化处理；淋洗溶剂为水和体积比为1/3的甲醇水混合溶液，洗脱溶剂为甲醇；

（三）标准溶液的配制：配制吲唑磺菌胺、氟啶酰菌胺、硅噻菌胺、啶酰菌胺溶液阶梯浓度的混合标准工作溶液，混合标准工作溶液的浓度为1.0 ng/mL、2.0ng/mL、5.0 ng/mL 、10.0 ng/mL 和20.0 ng/mL，内标物啶酰菌胺-D4浓度为1.0 ng/mL，所述气相色谱和串联质谱的参数条件如下：

色谱柱：HP-5MS；30 m×0.25 mm×0.25 μm

流速：1.2 ml/min 高纯氦

仪器：Agilent 7890B-7000C

碰撞气：高纯氮：1.5ml/min，猝灭流量：2.25ml/min 高纯氦

升温程序：80℃升温到200℃，升温速度为每分钟25℃；200℃升到310℃，升温速度为每分钟10℃，并在310℃保持3分钟；

进样口温度：350℃；接口280℃

进样量：1µL；不分流进样；

离子化：EI源；

（四）待测样品的检测：将步骤（二）中的待测样品溶液和混合标准工作溶液在气相色谱-串联质谱仪上分别进样，获得以混合标准工作溶液中吲唑磺菌胺、氟啶酰菌胺、硅噻菌胺、啶酰菌胺的浓度和啶酰菌胺-D4浓度的比值为横坐标，再以混合标准工作溶液中吲唑磺菌胺、氟啶酰菌胺、硅噻菌胺、啶酰菌胺的峰面积和啶酰菌胺-D4峰面积的比值为纵坐标的工作曲线，还有获得可以确定母离子的吲唑磺菌胺、氟啶酰菌胺、硅噻菌胺、啶酰菌胺、啶酰菌胺-D4的一级质谱图，确定母离子后，采用子离子扫描获得二级质谱图，然后从二级质谱图中选取定量离子和定性离子，然后用工作曲线对定量离子进行定量计算，内标法定量获得待测样品溶液中吲唑磺菌胺、氟啶酰菌胺、硅噻菌胺、啶酰菌胺的浓度。