[发明专利]一种用于鉴别刀鲚和短颌鲚的分子标记及其应用

说明书

本发明公开了一种用于鉴别刀鲚和短颌鲚的分子标记及其应用。该标记位于刀鲚和短颌鲚的线粒体COI基因上，具体位置为线粒体COI基因的236bp处，碱基变异信息为T>C，刀鲚在此位点为T，短颌鲚在此位点为C。一种鉴别刀鲚和短颌鲚的方法，通过检测所述的标记来鉴别刀鲚和短颌鲚。本方法克服了仅仅依靠经验观察来鉴别刀鲚和短颌鲚的诸多不足，为刀鲚和短颌鲚的准确鉴定提供了快速、可靠的分子生物学鉴定技术。

技术领域

本发明属于分子生物学检测技术领域，涉及一种用于鉴别刀鲚和短颌鲚的分子标记及其应用。

背景技术

刀鲚(Coilianasus)，俗名刀鱼，是长江下游人民所喜食的重要经济鱼类，其肉质肥美难以笔墨形容，为“长江三鲜”之一。刀鲚为洄游性鱼类，平时生活在海里，每年2～3月份由海入江，并溯江而上进行生殖洄游，主要分布于长江中下游的干流之中。短颌鲚(C.brachygnathus)是德国人Kreyenberg等(1908)依据采自洞庭湖的标本所确立的一个物种，其生长和繁殖均在长江中下游的江河湖泊内，属于淡水鱼类。短颌鲚与刀鲚亲缘关系很近，但是由于其不进行生殖洄游，品质与口感明显逊色于长江刀鲚，其经济价值与刀鲚相比差距很大。由于短颌鲚和刀鲚的外形较为接近，普通消费者难以区分，一些商家故意混淆，用短颌鲚冒充长江刀鲚进行出售，严重损害了消费者的利益。目前市场上对于长江刀鲚和短颌鲚的鉴别主要靠经验观察，一般通过观察其外部形态(体型、体色、鳍式、鳞式等)来确定待售个体是否为正宗的长江刀鲚。或者通过“品尝”(以鱼味鲜美度为标准)来判断是否为正宗的长江刀鲚，但是只有老渔民或经常吃鱼的人才能分辨真假。由于这些鉴别方法主观性较强，具体标准很难掌握，往往存在着很大的不确定性——不同人的观察结果往往不同，常会引起较大的争议。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种用于鉴别刀鲚和短颌鲚的分子标记。

本发明的另一目的是提供一种鉴别刀鲚和短颌鲚的方法。

一种用于鉴别刀鲚和短颌鲚的分子标记，该分子标记位于刀鲚和短颌鲚的线粒体COI基因上，具体位置为线粒体COI基因的236bp处，有一个单碱基变异位点，变异信息为T>C，刀鲚在此位点为T，短颌鲚在此位点为C。

本发明所述的分子标记在鉴别刀鲚和短颌鲚中的应用。

一种鉴别刀鲚和短颌鲚的方法，通过检测所述的分子标记来鉴别刀鲚和短颌鲚。

本发明方法优选检测所述的变异位点，此位点为T则是刀鲚，此位点为C则是短颌鲚。

作为本发明方法的一种优选方式，提取不同待鉴别鱼类个体的基因组DNA，采用PCR产物直接测序法获得不同个体的COI基因序列并进行比对，线粒体COI基因的236bp处为T则是刀鲚，此位点为C则是短颌鲚，从而鉴别刀鲚和短颌鲚。

作为本发明方法的进一步优选，提取待鉴别鱼个体的基因组DNA，通过PCR扩增包含该变异位点的线粒体COI基因片段，采用BspACI限制性内切酶对所得到的PCR产物进行酶切，用2％的琼脂糖凝胶电泳对酶切产物进行分离，短颌鲚产生大小分别为216bp和105bp的两个条带，而刀鲚的相应扩增片段不能被酶切(显示为321bp的单一条带)。

作为本发明方法的进一步优选，所述的PCR-RFLP中使用的PCR引物对为SEQ IDNO.1/SEQ ID NO.2；使用的限制性内切酶为BspACI限制性内切酶。

作为本发明方法的另一种优选方式，提取待鉴别鱼个体的基因组DNA，PCR扩增含有所述变异位点的基因片段，通过直接测序获得包含所述分子标记的序列，从而鉴别该个体是刀鲚还是短颌鲚。

用于鉴别刀鲚和短颌鲚的PCR引物，上游引物为SEQ ID NO.1，下游引物为SEQ IDNO.2。