[发明专利]小片段BMG抗体的制备方法及β2-微球蛋白检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种小片段BMG抗体的制备方法及含有该抗体的高灵敏度的β2‑微球蛋白检测试剂盒。所述试剂盒由R1试剂、R2试剂和校准品三部分组成，其中R1试剂为含有一种解离蛋白剂的磷酸盐缓冲体系，R2试剂为含有一定量包被有小片段BMG抗体的胶乳颗粒的缓冲液，校准品主要为牛血清基质。本发明采用一种解离蛋白剂，最大限度暴露样本中的抗原位点，增加抗原抗体的结合率，并且采用一种更稳定、放大信号效果更理想的乳胶粒子包被一种特殊的小片段BMG抗体，通过这两个手段，从而实现本发明试剂的高灵敏度。解决了目前市场上BMG试剂检测灵敏度不高，价格昂贵等问题。

技术领域

本发明涉及一种小片段BMG抗体的制备方法及含有该抗体的β2-微球蛋白检测试剂盒，尤其是一种医学免疫体外诊断领域。

背景技术

β2-微球蛋白是瑞典学者Berggard在1968年首先从可致肾小管蛋白尿的Wilson’s病和慢性镉中毒等患者的24小时尿中分离发现，是分子量为11815Da的血清蛋白质，其分子内含一对二硫键，不含糖，血清蛋白电泳位于β2区域。

β2-微球蛋白的合成比较稳定，正常情况下其平均生成速率估计为2.4mg/kg/day。该蛋白的代谢仅依赖于肾脏，有细胞表面脱落或释放入血的β2-微球蛋白，从肾小球自由过滤，99.9％在近肾端小管重吸收并分解代谢，不再反流入血，因而在正常情况下血清β2-微球蛋白保持着稳定水平。

β2-微球蛋白分子量小，因而能够从肾小球自由地滤过，而且β2-微球蛋白除了由肾脏排泄外极少有肾外的分解代谢，其在体内的产生速率恒定，年龄、性别、机体肌肉组织不会影响其血清水平含量。在体内β2-微球蛋白生成不增加的情况下，血清β2-微球蛋白水平升高是反映肾小球滤过功能损伤的极灵敏指标，而且比血清尿素氮、肌酐对肾小球滤过的评价更敏感。血清β2-微球蛋白水平升高，然而尿β2-微球蛋白水平保持正常，这是由于肾脏肾小球的滤过功能损伤所致，常常见于急性、慢性肾炎、肾功能衰竭等。近端肾小管是β2-微球蛋白在体内处理的唯一场所，尿β2-微球蛋白是评价近端肾小管功能的特异指标，当近端肾小管轻度受损时，尿β2-微球蛋白会明显增加，能够准确反映近端肾小管损伤的程度。血清β2-微球蛋白正常而尿β2-微球蛋白升高常见于先天性近曲小管功能缺陷、范科尼综合征、急性肾小管坏死、肾小管间质损伤、Wilson’s病等。

β2-微球蛋白的检测方法有RIA、ELISA、TRFIA、微粒子酶免疫分析法、毛细管电泳免疫分析法、微流控芯片电泳免疫法、免疫比浊法等。在全自动生化分析仪上进行的β2-微球蛋白免疫比浊法测定，不会对实验人员造成放射性污染，稳定性、精密度和准确性性能良好，能在临床常规测定并能满足临床检测要求。在临床检验科室必备的全自动生化分析仪上使用，检测方便，能够快捷迅速的发出检测报告，并且对轻中度溶血和轻度黄疽、脂血有一定的抗干扰能力。目前市场上的β2-微球蛋白检测试剂普遍存在灵敏度低的问题，进口试剂价格又比较昂贵。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种小片段BMG抗体的制备方法及含有该抗体的β2-微球蛋白检测试剂盒，该试剂盒用于检测血清中BMG的含量，以达到操作简便、灵敏度高、特异性好，快速、测定结果准确可靠的目的。

本发明是通过以下技术方案实现的：

第一方面，本发明提供了一种小片段BMG抗体的制备方法，其包含以下步骤：

用蛋白酶对BMG抗体进行水解，得到Fab片段；

在PH8.5的条件下加入二硫苏糖醇，室温作用5小时打开所述Fab片段的二硫键，暴露出巯基后，用人工多肽进行偶联，得到所述的小片段BMG抗体。

本发明中制备的小片段BMG抗体，是去掉了抗体中Fc片段、通过多肽偶联而成的抗体。

作为优选方案，所述蛋白酶为胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶中的一种或几种。