[发明专利]修饰的N-乙酰神经氨酸醛缩酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种修饰的N-乙酰神经氨酸醛缩酶，其特征在于，所述N-乙酰神经氨酸醛缩酶的氨基酸侧链经烷基化修饰及酶空间结构修饰；

所述的修饰的N-乙酰神经氨酸醛缩酶的制备方法包括以下步骤：

A1、将N-乙酰神经氨酸醛缩酶与烷基化试剂进行反应，去除其氨基酸侧链的羧基；

A2、将去除羧基后的N-乙酰神经氨酸醛缩酶用盐酸胍进行修饰，即可。

2.如权利要求1所述的修饰的N-乙酰神经氨酸醛缩酶，其特征在于，步骤A1中，所述烷基化试剂包括碳化二亚胺、碘乙酸和碘乙酰胺中的一种或几种混合。

3.如权利要求1所述的修饰的N-乙酰神经氨酸醛缩酶，其特征在于，步骤A1中，所述的反应具体为：使用三乙胺作为溶剂，N-乙酰神经氨酸醛缩酶与烷基化试剂以1:3～5的质量比混合，在室温下搅拌过夜。

4.如权利要求1所述的修饰的N-乙酰神经氨酸醛缩酶，其特征在于，步骤A2中，所述修饰的具体方法为：在所述含去除羧基的N-乙酰神经氨酸醛缩酶的溶液中加入盐酸胍，使用冰醋酸调节PH至5.0～6.0下，室温搅拌过夜。

5.如权利要求4所述的修饰的N-乙酰神经氨酸醛缩酶，其特征在于，所述去除羧基后的N-乙酰神经氨酸醛缩酶与盐酸胍的质量比为1:5～10。

6.一种含有如权利要求1所述的修饰的N-乙酰神经氨酸醛缩酶的试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2；

所述试剂R1包括以下浓度的各组分：

试剂R2包括以下浓度的各组分：

7.如权利要求6所述的含有修饰的N-乙酰神经氨酸醛缩酶的试剂盒，其特征在于，所述的缓冲液为Good’s缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液中的一种或几种；所述R1中缓冲液的PH为5.0-7.0，试剂R2中缓冲液的PH为8.0-10.0。

8.如权利要求6所述的含有修饰的N-乙酰神经氨酸醛缩酶的试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为吐温20、吐温80、曲拉通-100、十二烷基苯磺酸钠中的一种或几种。

9.如权利要求6所述的含有修饰的N-乙酰神经氨酸醛缩酶的试剂盒，其特征在于，所述稳定剂为牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖、螯合剂EDTA类中的一种或几种；所述防腐剂为叠氮钠或proclin系列防腐剂。