[发明专利]硼酸衍生物功能化荧光探针在检测5-羟甲基胞嘧啶中的应用

权利要求书

1.硼酸衍生物功能化荧光探针在检测5-羟甲基胞嘧啶中的应用，其中所述的硼酸衍生物功能化荧光探针是表面固载2-(4-二羟基硼烷)苯基-4-羧基喹啉的聚甲基丙烯酸环氧丙酯纳米微球，制备方法为：将聚甲基丙烯酸环氧丙酯纳米微球溶解于蒸馏水中，并加入过量乙二胺，在氮气保护下，80℃反应完全后，离心、洗涤、干燥，得到氨基功能化的聚甲基丙烯酸环氧丙酯纳米微球；将氨基功能化的聚甲基丙烯酸环氧丙酯纳米微球分散于无水乙醇中，并依次加入2-(4-二羟基硼烷)苯基-4-羧基喹啉、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺，其中氨基功能化的聚甲基丙烯酸环氧丙酯纳米微球与2-(4-二羟基硼烷)苯基-4-羧基喹啉、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔量比为4:4:9:9，超声分散均匀，40℃反应完全后，离心分离，产物依次用超纯水、无水乙醇和乙腈洗涤，自然干燥，得到表面固载2-(4-二羟基硼烷)苯基-4-羧基喹啉的聚甲基丙烯酸环氧丙酯纳米微球，即硼酸衍生物功能化荧光探针。

2.根据权利要求1所述的硼酸衍生物功能化荧光探针在检测5-羟甲基胞嘧啶中的应用，其特征在于：聚甲基丙烯酸环氧丙酯纳米微球的粒径为150～400nm。

3.根据权利要求1或2所述的硼酸衍生物功能化荧光探针在检测5-羟甲基胞嘧啶中的应用，其特征在于具体检测方法由下述步骤组成：

（1）将5-羟甲基胞嘧啶DNA标准样品与尿苷二磷酸葡萄糖在T4β-葡萄糖基转移酶的催化作用下，25～37℃反应1～2小时，分离提纯产物，得到5-糖基化胞嘧啶DNA；

（2）将硼酸衍生物功能化荧光探针与5-糖基化胞嘧啶DNA加入pH=7.4的磷酸缓冲液中，室温震荡反应，用荧光光谱仪测量不同浓度5-糖基化胞嘧啶DNA对应体系的荧光强度，绘制F-F₀值随5-糖基化胞嘧啶DNA浓度变化的标准曲线；

（3）按照步骤（2）的方法用荧光光谱仪测量待测DNA样品的荧光强度，根据待测DNA样品的F-F₀值，结合标准曲线的线性方程即可高选择性识别5-羟甲基胞嘧啶DNA并确定待测DNA样品中5-羟甲基胞嘧啶的含量。

4.根据权利要求3所述的硼酸衍生物功能化荧光探针在检测5-羟甲基胞嘧啶中的应用，其特征在于：在步骤（2）中，所述磷酸缓冲液中硼酸衍生物功能化荧光探针的初始浓度为0.2～1mg/mL。