[发明专利]一种金‑上转换纳米粒子三聚体的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种金-上转换纳米粒子三聚体的制备方法，其特征在于包括金纳米粒子的合成，上转换纳米粒子的提供，金-上转换纳米粒子三聚体的组装及结构表征，具体步骤如下：

（1）金纳米粒子的合成：进行20nm 粒径金纳米粒子的合成；48.75mL超纯水在搅拌下加入1.25mL 4g/L的氯金酸，使其沸腾，沸腾状态保持2-3min，加入1.2mL 10mg/mL的柠檬酸钠水溶液，观察颜色变化，待颜色不变后冷却至室温，放入冰箱中待用；

（2）上转换纳米粒子的提供：由北京万德高科技发展有限公司购买；

（3）金-上转换纳米粒子三聚体的组装：取两管50mL步骤（1）制备的已浓缩好的 10nM 20nm粒径金纳米粒子，分别与巯基修饰的Mucin-1的适配体及互补序列进行偶联，金纳米粒子︰巯基修饰的Mucin-1的适配体的摩尔比为1︰3，金纳米粒子︰互补序列的摩尔比也为1︰3；再将50mL上转换纳米粒子与巯基修饰的AFP的适配体偶联，其中上转换纳米粒子︰巯基修饰的AFP摩尔比为1︰5；三管试剂均在室温下过夜反应，13000r/min 离心15min，弃上清，然后用50mL的TBE缓冲液分散沉淀，分别得到Au-Mucin-1适配体、Au-互补序列及UCNP- AFP适配体，待用；

将50mL Au-Mucin-1适配体、50mL Au-互补序列和50mL UCNP- AFP适配体杂交反应12h，得到组装产物金-上转换纳米粒子三聚体Au-Au-UCNP；离心15min，弃上清，后用100mL的超纯水分散，进行TEM、荧光和拉曼表征。

2.根据权利要求1所述金-上转换纳米粒子三聚体的制备方法，其特征在于：

Mucin-1适配体：5’-GCAGTTGATC CTTTGGATAC CCTGG-SH-3’；

互补序列：5’-GATCAACTGC ACAGCACCAC AGACC-SH-3’ ；

AFP适配体：5’-SH-GGCAGGAAGA CAAACAGGAC CGGGTTGTGT GGGGTTTTAA GAGCGTCGCC TGTGTGTGGT CTGTGGTGCT GT-3’。

3.用权利要求1方法制备的金-上转换纳米粒子三聚体的应用，其特征在于：用于癌症标志物的多重超灵敏检测，具体采用金-上转换纳米粒子三聚体检测甲胎蛋白AFP和粘蛋白-1Mucin-1。

4.根据权利要求3所述金-上转换纳米粒子三聚体的应用，其特征在于具体步骤如下：

（1）AFP的检测：取100mL的金-上转换纳米粒子三聚体Au-Au-UCNP，加入1mL不同浓度的甲胎蛋白AFP，使其终浓度在0-100aM，反应10min，进行荧光测试，绘制标准曲线；

（2）Mucin-1的检测：取100mL的金-上转换纳米粒子三聚体Au-Au-UCNP，加入1mL不同浓度的粘蛋白-1Mucin-1，使其终浓度在0-10fM，反应 10min，进行拉曼测试，绘制标准曲线；

（3）样品测试：取血清样品，稀释后取1mL，加入100mL Au-Au-UCNP组装体，进行荧光和拉曼测试，根据标准曲线得出样品所含AFP及Mucin-1的浓度，并与标准浓度进行比较。

5.根据权利要求4所述金-上转换纳米粒子三聚体的应用，其特征在于所述不同浓度的甲胎蛋白AFP具体为0、1、2、5、10、20、50、100aM；不同浓度的粘蛋白-1Mucin-1具体为0、0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10fM。