[发明专利]一种提高香蕉成活率的组织培养方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及植物组织培养领域，特别涉及一种提高香蕉成活率的组织培养方法。

【背景技术】

香蕉属于芭蕉科芭蕉属为多年，起源于亚洲热带地区，是世界主要鲜果种类之一。香蕉属于三倍体有高度不育性，果实没有种子，只能通过无性繁殖传代，常用的繁殖手段为组织培养，自20世纪60年代以来，植物组织培养技术不断地发展，并逐步完善成熟，虽然植物组培的理论研究已相当精深，但技术环节还存在不少问题，例如在组织培养消毒过程中，常用的消毒剂选用的是化学制剂、农药、紫外线等，利用消毒剂在消毒过程中，消毒时间的掌握很重要，时间过长极易对植物造成危害，降低成活率，消毒时间过短又不能起到消毒的作用，造成污染。多年来国内外研究者对消毒剂进行了广泛研究和筛选,但至今没有发现一种能满足理想条件的消毒剂。常用的组织培养基选用的是MS培养基，培养基原料较贵，配置复杂，而且做为大生产时，成本较大。

目前，我国常用的灭菌消毒剂主要以升汞为主,国内外对汞的毒性作用进行了大量的研究,证实汞对细胞的每一生长过程都有重要影响,所以经过升汞灭菌的外植体,需彻底除去残留的Hg+,以消除微量的残留升汞对外植体的伤害。例如，中国专利CN 105284618A公开了一种香蕉无MS组织培养的方法，该发明提供了一种香蕉无MS组织培养的方法，使用木薯酒精厌氧发酵液替代基本培养基MS，该方案可以降低生产成本，变废为宝，但该方案并没有对消毒剂进行改进，因此，在现行的组织培养中需要提供一种理想的消毒剂，不仅能对外植体进行表面消毒，还不会对外植体进行侵害，同时还能降低组培的生产成本的组织培养方法。

【发明内容】

鉴于上述内容，有必要提供一种理想的消毒剂，不仅能对外植体进行表面消毒，还不会对外植体进行侵害，同时还能降低组培的生产成本的组织培养方法。

为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种提高香蕉成活率的组织培养方法，该组织培养方法包括以下步骤：

(1)培养前20h-24h对培养室进行灭菌消毒；

(2)外植体的选择：选择香蕉吸芽为外植体，长2cm-3cm，直径1cm-2cm；

(3)外植体的灭菌：外植体经过水冲洗、75％的酒精浸泡沥干后，在质量浓度为5％-8％的植物处理液中浸泡10min-20min进行灭菌，所述植物处理液的组成及重量百分数如下：30％-50％的灵芝浸出液、10％-20％的辣蓼草汁、10％-20％的大蒜汁、10％-20％的洋葱汁、5％-10％的藿香汁、5％-10％的仙人掌汁。

(4)初始诱导培养：将灭菌后的外植体接种在诱导培养基中在培养箱中进行诱导培养，培养温度为26℃-28℃，用5红3绿2蓝光质的LED光灯进行光照，光照强度为400Lx-1000Lx，光照时间为20h-25h；

(5)继代培养：将诱导培养后长出新芽的外植体转接入继代培养基中在培养箱中进行继代培养，培养温度为26-28℃，用4红3绿3白LED光灯进行光照，光照强度为600Lx-1200Lx，光照时间为20h-25h，随着外植体的生长不断更换培养基，继代培养4-6代后将长成生根苗的幼苗转接到放有培养基质的营养杯中进行培养；

(6)炼苗：将营养杯中的香蕉幼苗放在大棚中进行炼苗，炼苗温度为24℃-28℃，光照为日光照射。

进一步的，所述诱导培养基组成为：COD含量为300mg/L-800mg/L的15％-20％木薯酒精废液，2.0g/L-4.0g/L的蔗糖溶液，5.0g/L-8.0g/L的灵芝浸出液，5.0g/L-8.0g/L的香蕉叶汁，2.0g/L-5.0g/L的辣蓼草汁，5.0g/L-8.0g/L的琼脂，0.1mg/L-0.5mg/L的吲哚丁酸。

进一步的，所述继代培养基组成为：COD含量为500mg/L-1000mg/L的15-20％木薯酒精废液，5.0g/L-8.0g/L的蔗糖溶液，5g/L-10g/L的灵芝浸出液，5.0g/L-10.0g/L的辣蓼草汁，6.0g/L-10.0g/L的琼脂。

进一步的，所述营养杯基质的重量百分比组成为：40％-60％的椰糠、20％-30％的稻杆，10％-20％的黄沙，5％-10％的有机肥。

进一步的，所述步骤(4)的LED灯安装在暗箱顶部，为单色LED灯管，灯管进行间隔排列，排列顺序为“红-绿-红-蓝-红-绿-蓝-红-绿-红”。