[发明专利]一种采用生物反应器生产山参培养根的方法

权利要求书

1.一种采用生物反应器生产山参培养根的方法，其特征在于：将新鲜的山参切块后诱导培养为外植体愈伤组织，再从该愈伤组织诱导生长出不定根组织——称之为山参培养根，三角瓶培养后又接种至气升式生物反应器中，在所需温度和通气控制范围内，在液体培养基中快速生长繁殖，针对山参培养根的生长过程添加了生长促进剂和人参皂甙生成诱导剂，山参培养根在生物反应器内培养结束后，再经清洗、浸泡、干燥，最后获得大量山参培养根成品；

具体的步骤为：

（1）山参培养根在含有蔗糖和IBA(吲哚丁酸)的100~120mL优化过的SCHENK HIDEBRANDT (SH)液体培养基的三角瓶内震荡扩增培养，温度为16~26℃温度范围，时间为32~40天，至山参培养根充满整个三角瓶；

（2）经三角瓶培养得到的山参培养根后，收集瓶内的山参培养根，无菌接种到装有12~14升含有蔗糖和IBA(吲哚丁酸)的优化过的SCHENK HIDEBRANDT (SH)液体培养基并灭菌后的气升式生物反应器内；

山参培养根在气升式生物反应器中培养的前28天内，培养温度控制范围在23～26℃，空气通气量控制范围在0.09～0.21 m³/h；在29天至结束培养，培养温度范围调整为19～21℃，空气通气量范围调整为0.012～0. 024 m³/h；其中分别在第29天添加人参皂甙生成诱导剂，第35天添加生长促进剂；

（3）山参培养根在气升式生物反应器内生长至山参培养根长出新的根须充满气升式生物反应器，培养结束，将须状山参培养根收集后，用清水冲洗干净、浸泡5~10分钟去除残留培养基，再经80~90℃通风干燥20~24小时即获得山参培养根成品；

于步骤（2）中，第29天加入人参皂甙生成诱导剂，每12-14升的液体培养基中添加人参皂甙生成诱导剂，所述人参皂甙生成诱导剂为500mL含有终浓度为50～100ppm的水杨酸，50～100μmol/L的亚麻酸，200~400ppm的透明质酸，200~400ppm的海藻多糖，摩尔浓度0.05~0.1%的聚乙二醇400的SCHENK HIDEBRANDT (SH)标准培养基中得到的人参皂甙生成诱导剂; 。

步骤（2）中，第35天加入生长促进剂，每12-14升的培养体系中添加生长促进剂，所述的生长促进剂为终浓度为200～400ppm生物素，10～16wt%的蔗糖，溶入体积为500mL的磷酸钾缓冲液中得到的生长促进剂，pH控制在5.8～6.0,其中钾离子浓度为0.5～2.0 mmol/；

山参培养根培养过程所使用的优化过的培养基为SCHENK HIDEBRANDT (SH) 液体培养基的改良培养基，所有优化过的SCHENK HIDEBRANDT (SH)液体培养基营养成分的浓度为SCHENK HIDEBRANDT (SH)标准液体培养基的0.7～0.8倍，每升SCHENK HIDEBRANDT(SH)标准液体培养基的成分有2500mg KNO₃，300mg NH₄H₂PO₄，151.02mg CaCl₂，195.34mgMgSO₄，10.0mg MnSO₄·H₂O，1.0mg KI，0.10 mg NaMoO₄·2H₂O，1.0mg ZnSO₄·7H₂O，0.20mgCuSO₄·5H₂O，15.0mg FeSO₄·7H₂O，20.0mg Na₂EDTA，1000 mg myo-inositol，5.0mgThiamine-HCl，0.50mg Pyridoxine-HCl，5.0mg Nicotinic-acid；山参培养根培养过程pH控制在5.7～5.9。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的气升式生物反应器为外形为圆筒状，内容积为18升；下口进气，上口排气，反应器摆放在支架上，每一支架可放18个反应器，称为一套气升式反应器。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：山参培养根在气升式生物反应器内生长天数为45～50。