[发明专利]抗口蹄疫O型病毒的单克隆抗体及抗体组合以及其在该病毒抗原、抗体检测中的应用

说明书

本发明抗口蹄疫O型病毒的单克隆抗体及抗体组合以及其在该病毒抗原、抗体检测中的应用，提出了口蹄疫O型病毒的非特异性单克隆抗体4H9anti及抗体组合，包括口蹄疫O型病毒的特异性单克隆抗体6D6anti和1F2anti及非特异性单克隆抗体2H10anti和非特异性单克隆抗体4H9anti。本发明可以实现对口蹄疫O型病毒抗原和抗体的检测，且能快速检出多种O型病毒毒株，用于检测口蹄疫O型病毒具有较好的广谱性，并具有高特异性、高灵敏度、快速检测的特点，可用于口蹄疫O型病毒疫苗生产、相关产品质检以及疫苗免疫效果的评价。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及口蹄疫O型病毒的单克隆抗体、分泌抗体的杂交瘤细胞株以及该抗体与其它抗体的组合与应用，该应用体现在通过对口蹄疫O型病毒的抗原和抗体检测，实现疫苗生产过程中对原料、中间产品和成品的监控，以及口蹄疫O型疫苗免疫后血清抗体水平的监控。

背景技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的传染病。FMDV目前有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3(即南非口蹄疫病毒1、2、3型)和Asia1(亚洲1型)7个血清型。各型之间几乎没有免疫保护力，感染了一型口蹄疫的动物仍可感染另一型口蹄疫病毒而发病。近十几年以来，全世界口蹄疫的流行态势发生了一些新的变化。一方面未消灭口蹄疫的国家和地区，口蹄疫继续流行，而另一方面已控制和消灭口蹄疫的国家和地区，也出现口蹄疫的发生和流行。从FAO/OIE口蹄疫参考实验室报告的资料来看，在1990～2002年之间，口蹄疫在世界范围内的流行还是非常严重的，7个型的口蹄疫均有流行，其中以O、A、和Asia1型的流行较为严重。

FMDV属于微核糖核酸病毒科(picornaviridae)口蹄疫病毒属(aphthavirus)的成员。感染FMDV的细胞培养液，电镜下观察，有四种粒子。最大粒子为完整病毒，直径23±2nm，沉降系数为146S，具有感染性，呈圆形或六角形，正二十面体对称，分子量6.9×10⁶Da，无囊膜，在氯化艳中的浮密度为1.43g/ml。病毒由中央的核糖核酸核芯和周围的蛋白壳体所组成，成熟病毒粒子约含30％的RNA，其余70％为蛋白质。第二种为不含有RNA的空衣壳，直径21nm，沉降系数为75S，没有感染性，有型特异性和免疫原性；第三种为衣壳蛋白亚单位，其直径为7nm，沉降系数为12S～14S，无RNA，无感染性，有抗原性；第四种为病毒感染相关抗原(Virus infection-associated antigen，VIA抗原)，沉降系数为4.5S，为病毒的非结构蛋白(病毒RNA聚合酶)，能诱发动物产生群特异抗体，无型特异性，在琼脂扩散试验中对各型口蹄疫病毒的抗体都呈现反应，可以应用VIA抗原检测各型口蹄疫病毒感染动物的血清抗体。

目前，口蹄疫病毒在全世界主要有7个血清型，以及65个以上亚型。各型之间几乎没有免疫保护力，感染了一型口蹄疫的动物仍可感染另一型口蹄疫病毒而发病，因此常常用多价疫苗来降低患口蹄疫的风险。O型口蹄疫为全世界流行最广的一个血 清型，我国流行的口蹄疫主要为O、A、C三型及ZB型(云南保山型)。口蹄疫O型包含多种毒株：O/GX/09-7、O/Mya98/XJ/2010、O/Mya98/BY/2010、O/JMS/2000、OZK/93等。

目前，口蹄疫灭活疫苗是预防该病发生的主要有效手段，主要通过将口蹄疫病毒体外培养后、灭活，然后与乳化剂混合制成免疫疫苗。为保证免疫效果，很多疫苗生产商将口蹄疫多种毒株混合在一起制成多价或多组分疫苗，比如金宇保灵生物药品有限公司生产的口蹄疫三价疫苗中包含口蹄疫O型(O/Mya98/BY/2010)、口蹄疫A型(Re-A/WH/09)和口蹄疫亚洲1型(JSL/06)三种毒株。

FMDV的免疫是依赖T细胞的B细胞应答，疫苗接种主要诱导中和抗体的产生。疫苗接种是特异性预防FMDV的可靠和有效手段，安全有效的疫苗是成功预防、控制乃至最终消灭FMDV的先决条件。FMDV弱毒疫苗和灭活疫苗等常规疫苗都具有良好的免疫原性，在预防和控制FMDV的过程中发挥着重要作用。