[发明专利]粤紫萁可育孢子培养及其繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于蕨类植物组织培养技术领域，尤其涉及一种粤紫萁可育孢子培养及其繁殖方法。

背景技术

蕨类植物在作为物种资源和保持生态平衡方面起着重要作用；其次,在研究植物的物种起源、进化和分类方面也极具科学价值；第三,它还有药用、食用、观赏等方面的用途。因此组织培养技术在蕨类植物的研究和生产中得到了广泛的应用。目前在蕨类的组织培养研究中，外植体可采用地下茎段或茎尖、嫩叶或叶原基、孢子等。通常蕨类的地下茎段或茎尖、嫩叶或叶原基都包被鳞片，消毒较难，而且珍稀种类个体数量本身就很少，材料来源本身十分珍贵，因此多采用孢子作为外植体进行繁殖。

粤紫萁(Osmunda mildei C.Chr.)是多年生中型草本蕨类植物，分布仅见于香港、深圳和江西崇义的齐云山，是特有的草本植物，稀少，及其珍贵。但是粤紫萁是一个杂合的二倍体种，孢子完全成熟并自然繁殖接近100％败育。已报道的粤紫萁总数不超过10株，为了扩大该种类的个体数量，达到保育该种的目的，研究出一种适合粤紫萁可育孢子的萌发和组培快繁方法十分必要。

中国专利局公开的专利文献201010594485.3《一种粤紫萁组织培养的方法》采用的是幼嫩茎尖的诱导和繁殖培养，由于粤紫萁总数非常稀少，这种模式或多或少的会伤害原株，造成原株的死亡，导致粤紫萁自然个体的减少，不利于野生个体的保护。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中粤紫萁植物孢子繁殖难的问题，提供一种适合杂合物种粤紫萁的可育孢子萌发和组培快繁方法。

本发明提供的粤紫萁可育孢子培养及其繁殖方法，包含以下步骤：

S1孢子的消毒处理：

3～5月份粤紫萁孢子囊由深绿刚转为淡绿时，将孢子叶片摘下，收集孢子粉，用灭菌水浸泡5-10min，然后倒去上清液，加入0.1％的HgCl₂溶液消毒处理2-6min，灭菌水冲洗后加适量灭菌水混匀制成悬浮液；

或者，3～5月份粤紫萁孢子囊由深绿刚转为淡绿时，将每个孢子小叶摘下，用0.1％的HgCl₂溶液消毒处理2-6min，灭菌水冲洗后吸干表面水分，切成含2～3个孢子囊的小块；

S2原叶体的获得：

将步骤S1消毒处理的孢子囊小块或孢子粉，接种在MS基本培养基并添加6-苄基嘌呤0.5～1.5㎎/L、萘乙酸0.01～0.1㎎/L，做培养处理，孢子萌发后经过丝状体、片状体逐渐长成原叶体；

S3原叶体中幼孢子体的形成：

将步骤S2所获得的原叶体转入1/2MS、1/4MS培养基中，做培养处理，待原叶体体积明显增大时，再转入相同的固体培养基中培养，形成孢子体幼苗；

S4生根培养及移栽：

将步骤S3产生的孢子体幼苗接种在含吲哚丁酸0.5～1.0㎎/L的培养基中，做培养处理，20d长出幼根，待根形成后，继续在原瓶中培养1个月，移入盆中栽培。

本发明提供的粤紫萁可育孢子培养及其繁殖方法，取材于粤紫萁植物孢子，利用植物组织培养技术获得大量无性繁殖系，培育出的原叶体和幼孢子体，既不会伤害植物原株，又解决了目前粤紫萁繁殖难的问题，可在短期内快速繁殖粤紫萁幼苗，能够满足研究其濒危机制及物种形成机制的大量取材需要，为拯救濒危植物粤紫萁作出了贡献；同时由于蕨类植物在城市绿地系统生物多样性中具有重要的作用，尤其是原生蕨类的开发，当绿化需要时短时间内就可以大量生产，将在绿化应用中有广阔的发展前景。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明提供粤紫萁可育孢子培养及其繁殖方法，主要包括：(1)孢子的消毒处理；(2)原叶体的获得；(3)原叶体中幼孢子体的形成；(4)孢子体幼苗生根培养以及移栽。上述步骤通过选取粤紫萁植物孢子培植原叶体和幼孢子体，解决了目前粤紫萁繁殖难的问题，可在短期内快速繁殖粤紫萁幼苗，有效保护了粤紫萁的稀有资源。

下面结合实施例对本发明做进一步详述。

实施例一：

本实施例包含以下步骤：

S1孢子的消毒处理：