[发明专利]一种非诊断目的的HIV抗体免疫检测方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物医学工程领域，尤其涉及一种非诊断目的的检测HIV抗体的方法及试剂盒。

背景技术

人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)是引起获得性免疫缺陷综合症(Acquired Immune Deficiency Syndrome，AIDS)的病原体。HIV抗体是HIV病毒进入人体后由人体免疫应答反应所产生，这种抗体对HIV病毒基本无效，但可一定程度上反应HIV的感染状态，是人体一项生理指标。

检测血液中的HIV抗体是目前最常用的检测艾滋病病毒感染的实验室方法，一般要经过两个步骤：首先做初筛试验，如果为阳性，再做确认试验，确认试验阳性才可诊断为艾滋病病毒感染。

目前，用于HIV抗体筛查试验的检测方法主要有酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoadsordent assay，ELISA)、化学发光免疫分析技术(chemiluminescence immunoassay，CLIA)、明胶颗粒凝集试验(gelatin particles agglutinate experiment，GPAT)、斑点免疫胶体金快速试验等。GPAT和斑点免疫胶体金快速试验等方法通过肉眼判断结果较为主观，且价格昂贵、结果不易保存。CLIA缺点在于标记催化酶或化学发光分子的发光反应不稳定，为间断的、闪烁性发光，而且在反应过程中易发生裂变，导致反应结果不稳定。此外，检测时需对结合相、游离相进行分离，操作步骤多，测试成本高。ELISA仍是临床上最常用的检测HIV抗体的方法，它具有灵敏、特异、快速等优点，然而ELISA的检测下限仍具有局限性，不能满足感染早期低浓度的HIV抗体水平的检测。

杂交链反应(hybridization chain reaction，HCR)是一种新型高效的核酸扩增方法，HCR可以在无酶的条件下实现DNA的扩增。中国发明专利申请CN103940989A公开了一种基于HCR和单分子计数的免疫荧光技术检测TNF-α。已有HIV抗体筛查方法仍存在诸多问题，需要建立检测灵敏高、便捷的检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种HIV抗体免疫检测方法及试剂盒，以降低HIV抗体的检测下限浓度，提高检测灵敏度。

为了解决上述技术问题，本发明通过HCR体系引入ELISA进行信号放大来实现HIV抗体的检测。该方法利用间接法ELISA捕获血清中的HIV抗体，通过生物素-亲和素系统引入HCR体系，HCR体系在常温下进行扩增，形成DNA双链聚合物。该聚合物标记了生物素，可以和亲和素标记的辣根过氧化物酶结合，从而进行显色检测。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种非诊断目的的HIV抗体免疫检测方法，包括：

使HIV抗原特异性地捕获检测样本中的HIV抗体，然后加入生物素标记二抗，孵育形成抗原-抗体-生物素标记二抗复合物；

在链霉亲和素存在的条件下，加入生物素化引物Biotin-I，孵育使所述复合物与Biotin-I结合，然后加入生物素化的发卡链Biotin-H1和发夹链H2进行杂交反应；

加入亲和素标记的辣根过氧化物酶，催化底物液显色，通过测定吸光度进行HIV抗体的定量检测；

所述Biotin-I碱基序列为5’-TCT CAA GGA CCA CCG CAT CTC TAC TTT TTT TTT T-biotin-3’；

所述Biotin-H1碱基序列为5’-GTA GAG ATG CGG TGG TCC TTG AGA CAA AGT TCT CAA GGA CCA CCG CAT-biotin-3’；

所述H2的碱基序列为5’-TCT CAA GGA CCA CCG CAT CTC TAC ATG CGG TGG TCC TTG AGA ACT TTG-3’。

在一个具体实施方式中，将HIV抗原包被于酶标板上，用封闭液处理后，将含有HIV抗体的检测样本加入微孔板，36～38℃温育，使HIV抗原特异性地捕获HIV抗体；加入生物素化羊抗人IgG在36～38℃温育，在微孔板上形成抗原-抗体-生物素标记二抗复合物。

所述生物素标记二抗可以为生物素化的羊抗人IgG或生物素化的鼠抗人IgG。

在一个具体实施方式中，Biotin-H1和H2先经下述预处理：经95～98℃水浴1～3min后，立即冰浴。