[发明专利]一种非诊断目的的HIV抗体免疫检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种非诊断目的的HIV抗体免疫检测方法，其特征在于包括：

使HIV抗原特异性地捕获检测样本中的HIV抗体，然后加入生物素标记二抗，孵育形成抗原-抗体-生物素标记二抗复合物；

在链霉亲和素存在的条件下，加入生物素化引物Biotin-I，孵育使所述复合物与Biotin-I结合，然后加入生物素化的发卡链Biotin-H1和发夹链H2进行杂交反应；

加入亲和素标记的辣根过氧化物酶，催化底物液显色，通过测定吸光度进行HIV抗体的定量检测；

所述Biotin-I碱基序列为5’-TCT CAA GGA CCA CCG CAT CTC TAC TTT TTT TTT T-biotin-3’；

所述Biotin-H1碱基序列为5’-GTA GAG ATG CGG TGG TCC TTG AGA CAA AGT TCT CAA GGA CCA CCG CAT-biotin-3’；

所述H2的碱基序列为5’-TCT CAA GGA CCA CCG CAT CTC TAC ATG CGG TGG TCC TTG AGA ACT TTG-3’;

所述生物素标记二抗为生物素化的羊抗人IgG或生物素化的鼠抗人IgG;

将HIV抗原包被于酶标板上，用封闭液处理后，将含有HIV抗体的检测样本加入微孔板，36~38℃温育，使HIV抗原特异性地捕获HIV抗体；加入生物素标记二抗在36~38℃温育，在微孔板上形成抗原-抗体-生物素标记二抗复合物；

所述Biotin-H1和H2先经下述预处理：经95~98℃水浴1~3min后，立即冰浴；

免疫反应之后，向微孔板中加入链霉亲和素在36~38℃温育，甩去孔中液体后拍干，加入Biotin-I在36~38℃温育，使所述复合物与Biotin-I结合；

加入Biotin-H1和H2，室温下反应1~3h，使Biotin-H1和H2打开发夹结构、交替杂交，形成有缺口的双链DNA聚合物；

加入亲和素标记的辣根过氧化物酶在36~38℃温育后倒出液体，加入底物缓冲液及底物液在36~38℃温育，再加入终止液，混匀后比色。

2.一种HIV抗体免疫检测试剂盒，其特征在于包括：

HIV抗原、生物素标记二抗、链霉亲和素、生物素化引物Biotin-I、生物素化的发卡链Biotin-H1、发夹链H2和亲和素标记的辣根过氧化物酶、包被液、封闭液、洗液、底物液、底物缓冲液和终止液；

所述Biotin-I碱基序列为5’-TCT CAA GGA CCA CCG CAT CTC TAC TTT TTT TTT T-biotin-3’；

所述Biotin-H1碱基序列为5’-GTA GAG ATG CGG TGG TCC TTG AGA CAA AGT TCT CAA GGA CCA CCG CAT-biotin-3’；

所述H2的碱基序列为5’-TCT CAA GGA CCA CCG CAT CTC TAC ATG CGG TGG TCC TTG AGA ACT TTG-3’；

所述HIV抗原浓度为80~120 ng/mL；

所述生物素标记二抗浓度为1.0~2.0 μg/mL；

所述链霉亲和素浓度为0.8~1.2 μg/mL；

所述Biotin-I浓度为4~6 nM，配置时加入SPSC缓冲液；

所述Biotin-H1和H2浓度均为80~120 nM，配置时加入SPSC缓冲液；

所述亲和素标记的辣根过氧化物酶浓度为18~22 μg/mL；

所述包被液为含80~120 ng/mL HIV抗原的8~12 mM PBS缓冲液；封闭液为含鲑鱼精DNA 40~60 μg/mL的0.8~1.2%BSA溶液。