[发明专利]一种标识化合物庆大霉素残留的分析方法

说明书

本发明属于兽药残留分析技术领域，具体涉及一种标识化合物庆大霉素残留的分析方法。本发明利用9‑芴甲基氯甲酸酯为衍生试剂与庆大霉素通过柱前衍生化方法，建立一种高效液相色谱‑荧光方法检测，判定待测动物制品中标识化合物庆大霉素的残留水平。所述的分析方法包括：在pH 9.0的硼酸缓冲液介质中，以9‑芴甲基氯甲酸酯溶液作为衍生化试剂，与庆大霉素进行衍生化反应，然后通过高效液相色谱分离。本发明的衍生产物的荧光检测波长为Ex 260nm，Em 315nm，最小检出量为50μg/L，在50～12000μg/L范围内对峰面积呈线性响应，结果重现性良好。

技术领域

本发明属于兽药残留分析技术领域，具体涉及一种标识化合物庆大霉素残留的分析方法。本发明利用9-芴甲基氯甲酸酯为衍生试剂与含氨基的庆大霉素药物通过柱前衍生化，然后通过高效液相色谱-荧光方法检测，判定待测动物制品中标识化合物庆大霉素的残留水平。

背景技术

庆大霉素(Geniamycin)是由小单孢菌属(MicromonosporaPurpurea)发酵产生的一组结构相近的多组分氨基糖昔类抗生素。它的主要活性成分是C组分，C组分具有较强的广谱抗菌作用，目前临床中广泛使用。

庆大霉素及其残留对人、畜均有明显的毒副作用，主要毒性反应为第八对脑神经的损害，引起耳鸣，头昏，眩晕等，若用量较大可致听力减退，重听，甚至有耳聋的可能，还会造成肾脏损害，心肌损伤，过敏反应等。

欧盟颁布的关于庆大霉素在组织中的最大残留量(庆大霉素C1、C1a、C2和C2a总和)，猪、牛的肌肉和肾脏组织中分别为50μg/kg、750μg/kg，牛奶100μg/kg。食品法典委员会(CAC)规定庆大霉素在猪、牛肌肉和肾脏组织中最高残留限分别为100μg/kg、5000μg/kg、牛奶为200μg/kg。我国农业部对牛和猪肌肉、肾脏和牛奶中庆大霉素的最高残留限量规定同CAC。

庆大霉素残留检测方法主要有微生物学法和高效液相色谱法。目前国内关于庆大霉素残留的检测方法主要为微生物法，国外大部分采用柱前衍生或柱后衍生荧光检测的方法。美国FSIS(1991)推荐的猪可食性组织中庆大霉素残留检测的高效液相色谱-柱后衍生法，组织中庆大霉素用1N硫酸提取，IRC-50氨基固相柱萃取，液-液分配净化，柱后衍生，高效液相色谱荧光检测器测定，Ex为335nm，Em为418nm，OPT(o-phthalaldehyde)为衍生试剂，方法的最低检出限为400μg/kg。Posyniak(2001)采用液相色谱柱前衍生同时检测庆大霉素和新霉素在组织中的残留，样品采用磷酸缓冲液提取，三氯乙酸沉淀蛋白，SPE净化，方法的最低检测限为500μg/kg，其回收率为76％～86％。Heller(2005)建立了弱阳离子交换离子阱质谱检测牛奶中新霉素和庆大霉素的残留的分析方法，牛奶样品经过酸化，离心，除去脂肪层，用柠檬酸调节pH至中性，弱阳离子交换，酸化甲醇洗脱，离子对液相色谱分离，选择离子进行定性和定量。庆大霉素柱后衍生，需要特殊的柱后衍生仪器设备，许多检测单位可能不具备此仪器设备，带来检测困难。庆大霉素柱前衍生，具备所需试验条件简单，不需要附加的衍生仪器设备，操作简便等特点，可以用于庆大霉素残留测定。但是目前还未有柱前衍生测定庆大霉素的检测方法。

9-芴甲基氯甲酸酯与庆大霉素的氨基发生衍生反应，衍生产物具有荧光基团，可采用高效液相色谱-荧光检测。但是目前还未有采用9-芴甲基氯甲酸酯与庆大霉素衍生，液相色谱-荧光检测方法测定动物性产品中庆大霉素残留的报道。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术的不足，提供一种标识化合物庆大霉素残留的分析方法。本发明利用9-芴甲基氯甲酸酯为衍生试剂与含氨基的庆大霉素药物通过柱前衍生化，产生较强的荧光，然后通过高效液相色谱-荧光方法检测，判定待测动物制品中标识化合物庆大霉素的残留水平。本发明灵敏度高，反应快速高效，操作简便；与柱后衍生相比较，不需要附加的衍生仪器设备。

本发明的总体技术方案如下：