[发明专利]一种标识化合物庆大霉素残留的分析方法

权利要求书

1.牛奶、猪和鸡肌肉中标识化合物庆大霉素的残留分析方法，其特征在于：所述的方法包括以下步骤：

(1)样本的前处理步骤，称取牛奶、猪和鸡肌肉5±0.05g置于聚丙烯离心管中，加入磷酸盐缓冲液10mL，旋涡混匀3min，加入50％三氯乙酸水溶液5mL，旋涡混匀1min，于12000r/min 4℃离心15min，转移上清液至另一聚丙烯离心管中，加入磷酸盐缓冲液5mL和50％三氯乙酸水溶液2.5mL重复提取一次，合并两次提取液，加正己烷5mL，旋涡混匀2min，于4℃12000r/min离心15min，弃去正己烷层，水层备用；

磷酸盐缓冲液的配制：取氯化钠18g，二水磷酸氢二钠4.4g，磷酸二氢钠

1.1g，用适量蒸馏水溶解，最后用10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至7.4，加蒸馏水稀释至1000mL；

(2)净化步骤：固相萃取小柱依次用甲醇、水、2％甲酸水溶液各3mL活化，取备用液上柱，依次用2％浓度的甲酸水溶液3mL，甲醇3mL淋洗一次，再用1％浓度的氨化甲醇溶液淋洗两次，每次3mL，吹干柱子，最后用5％浓度的氨化甲醇4mL洗脱，收集洗脱液；在低于35℃水浴中用氮气吹干；

(3)衍生化步骤：将庆大霉素样本吹干后，用0.4mL的硼酸缓冲液溶解，加0.6mL衍生化试剂9-芴甲基氯甲酸酯；衍生化反应体系中庆大霉素与9-芴甲基氯甲酸酯的摩尔比为1∶50～100；硼酸缓冲液浓度为0.5mol/L；反应中混合液的pH值为8.5～9.5，反应温度为20～35℃；反应时间为25～35min；

硼酸缓冲液的配制：称取硼酸3.1g，用适量水溶解后用10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至9.0，用水溶解并稀释至100mL；

高效液相色谱-荧光检测的技术条件：

高效液相色谱柱：Thermo BDS C18柱，250mm×4.6mm×5μm；

流动相：乙腈:水＝88:12；

流速：1.0mL/min；

检测波长：Ex 260nm，Em 315nm。