[发明专利]分离测定帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种分离测定帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的方法。

背景技术

帕布昔利布，商品名IBRANCE，是FDA批准的首个细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(CDKs4/6)抑制剂，CDKs4和6作为细胞周期的关键调节因素，能够触发细胞周期进展。IBRANCE在美国的适应症为联合来曲唑用于治疗雌激素受体阳性，人类表皮生长因子受体2阴性(ER+/HER2-)绝经后晚期乳腺癌患者，作为初始的内分泌治疗为基础的方案治疗转移性疾病。帕布昔利布中间体Z1是合成帕布昔利布的关键中间体，其分子式为C₂₇H₃₄BrN₇O₃，分子量为584.52，中间体Z1化学名：tert-Butyl 4-[6-(6-bromo-8-cyclopentyl-5-methyl-7-oxo-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-2-ylamino)pyridin-3-yl]piperazine-1-carboxylate，其结构式为式Ⅰ所示：

在帕布昔利布的合成过程中，其中间体Z1可能存在几个关键的工艺杂质和反应副产物，以及反应原料的残留。目前帕布昔利布中间体Z1合成过程中控制的有关物质有两个，即结构式如式Ⅱ所示的杂质1和结构式如式Ⅲ所示的杂质2，杂质1的化学名为：1-Boc-4-(6-aminopyridin-3-yl)piperazine，杂质2的化学名为：6-Bromo-2-chloro-8-cyclopentyl-5-methylpyrido[2,3-d]pyri- midin-7(8H)-one。其中杂质1还为基因毒性杂质，基因毒性杂质是指化合物本身直接或者间接损伤细胞DNA，导致生物体产生基因突变或者发生体内诱变，具有致癌性或者潜在倾向。根据EMA《基因毒性杂质限度指南》(2006年)规定，应对基因毒性杂质在帕布昔利布中的含量进行严格控制，按帕布昔利布最大日计量和最长用药时间计算该杂质的限度应控制不超过0.048％。

另外，为了控制帕布昔利布中间体Z1的质量，还需要对帕布昔利布中间体Z1及其他相关物质的含量也要进行严格控制。因此，为了控制帕布昔利布中间体Z1的质量，对帕布昔利布中间体Z1及其相关物质进行分离测定显得尤为重要，目前还没有公开的方法报道分离测定帕布昔利布中间体Z1及其相关物质的方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于开发一种分离测定帕布昔利布中间体Z1及其相关物质的方法，该方法能够实现帕布昔利布中间体Z1及其相关物质的有效分离，还能够准确测定帕布昔利布中间体Z1及其相关物质的含量，专属性强，灵敏度高，对于实现对帕布昔利布中间体Z1的质量控制、安全性保证及对帕布昔利布原料和制剂质量控制具有极其重要的意义。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

分离帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的方法，取供试品制备供试品溶液，然后以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以水和有机溶剂的混合液作为流动相进行洗脱，所述有机溶剂为甲醇、乙腈、乙醇、异丙醇中的一种或多种；所述帕布昔利布中间体Z1的结构式如式Ⅰ所示：

优选的，所述的方法，以水和有机溶剂的混合液作为流动相进行梯度洗脱。

在本发明的一个实施例中，所述梯度洗脱设置如下：

所述流动相A为水，所述流动相B为有机溶剂。

作为更优选的，所述梯度洗脱设置如下：

所述流动相A为水，所述流动相B为有机溶剂。

进一步，所述的方法，所述有机溶剂更优选为甲醇或乙腈。

进一步，所述的方法，所述的流动相，所述水可采用0.01mol/L六氟磷酸钾缓冲溶液代替。

进一步，所述的方法，所述有关物质包括如式Ⅱ所述的杂质1和/或如式Ⅲ所述的杂质2：

进一步，所述的方法，制备供试品溶液采用的稀释剂为乙腈与0.05-0.2％三氟乙酸水溶液的混合溶液。

进一步，所述的方法，所述乙腈与0.05-0.2％三氟乙酸水溶液的体积比为20-80：20-80。

优选的，所述三氟乙酸水溶液的浓度为0.1％。

进一步，所述的方法，所述供试品溶液的浓度为0.2mg/ml-1.0mg/ml。

进一步，所述的方法，所述流动相洗脱的流速为0.5ml/min-2.0ml/min。