[发明专利]一种胰高血糖素的纯化方法

权利要求书

1.一种胰高血糖素的纯化方法，其特征在于，包括：

步骤1、将胰高血糖素粗肽溶解后，调节粗肽溶液的pH至碱性，往粗肽溶液中加入蛋白变性剂和氯化物盐反应至胰高血糖素含量不再增加；

步骤2、将步骤1经过处理的粗肽溶液降温后进行RP-HPLC纯化和转盐。

2.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述蛋白变性剂为盐酸胍、尿素或两者的组合。

3.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述蛋白变性剂的浓度为100mmol/L。

4.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述氯化物盐为氯化钠、氯化钾、氯化铵的一种或者两种以上。

5.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述氯化物盐的浓度为200-400mmol/L。

6.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述调节粗肽溶液的pH至碱性为以碱性物质调节粗肽溶液的pH为9.5-10。

7.根据权利要求1-6任意一项所述纯化方法，其特征在于，步骤2为：

将步骤1经过处理的粗肽溶液降温后，以复合盐溶液为流动A相，以乙腈为流动B相进行RP-HPLC梯度洗脱纯化，收集目的峰多肽溶液浓缩，然后进行转盐；

所述复合盐溶液为高氯酸盐、硫酸盐和磷酸的混合水溶液。

8.根据权利要求7所述纯化方法，其特征在于，步骤2为：

将步骤1经过处理的粗肽溶液降温后，以十八烷基键合硅胶为固定相，以复合盐溶液为流动A相，以乙腈为流动B相进行RP-HPLC梯度洗脱纯化，收集目的峰多肽溶液浓缩，然后进行转盐。

9.根据权利要求7所述纯化方法，其特征在于，所述高氯酸盐为高氯酸钠。

10.根据权利要求7所述纯化方法，其特征在于，所述硫酸盐为硫酸铵。

11.根据权利要求7所述纯化方法，其特征在于，所述复合盐溶液的pH值为2.0-2.2。

12.根据权利要求7所述纯化方法，其特征在于，所述硫酸盐的浓度为2-120mmol/l，所述高氯酸盐的浓度为4-75mmol/l，所述磷酸的加入量为加入至复合盐溶液pH值为2.0-2.2。

13.根据权利要求7所述纯化方法，其特征在于，所述梯度洗脱如表1：

表1

14.根据权利要求7所述纯化方法，其特征在于，所述转盐为：

将色谱柱冲洗干净后上样，用含乙腈的氯化铵溶液冲洗，以0.02％盐酸为A相，以乙腈为B相梯度洗脱，乙腈梯度：B％：24％—39％，60min，收集目的峰，将收集的胰高血糖素溶液浓缩后冻干。