[发明专利]TNFSF15蛋白在制备治疗黑色素瘤药物中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，特别涉及TNFSF15蛋白在制备治疗黑色素瘤药物中的用途，以及与顺铂联用制备治疗黑色素瘤药物中的用途。

背景技术

恶性黑色素瘤(malignant melanoma,MM)是由于遗传因素、环境因素共同影响而引起的一种发生在皮肤或者其他器官黑色素细胞的肿瘤。本病临床表现为压痛、瘙痒、出血、溃疡等，老年人症状较年轻人为重。这种恶性肿瘤的增长速度要比其他类型的快很多，在过去的30年中，美国恶性黑色素瘤的发生率增长了一倍。世界卫生组织报道，每年在全世界范围内有132,000例此类的恶性肿瘤被确诊。如果恶性黑色素瘤可以在早起被诊断出来，可以通过外科手术切除肿瘤，有80％的病例通过此方式治疗。然而对于现有的治疗手段来说转移性黑色素瘤是十分顽固难以治疗的，病人的预后也会很差，这部分病人的六个月及5年的平均存活率都低于5％。因此新的治疗策略亟待开发。

化疗在恶性黑色素瘤治疗中占有重要的地位。对于病程中晚期或具有高危因素的早期病变应予以区域性或者全身性化学药物治疗。化疗可用于手术前后，放疗前后，或与放疗同时进行，从而提高疗效。目前化疗药物主要有达卡巴嗪(dacarbazine，氮烯咪胺，DTIC)、卡莫司汀(sarmustine，BCNU)、长春新碱(vincristine，VCR)、美法兰(melphalan，MEL)、放线菌素D和顺铂(cisplatin，DDP)等。顺铂(DDP)是目前临床上多种化疗方案中的主要药物之一，可通过与癌细胞脱氧核糖核酸(DNA)发生交叉联结，诱导肿瘤细胞的凋亡而起抗癌作用。黑色素瘤细胞对于化疗药物相对不敏感，联合化疗方案反应率优于单一药物。所以寻找与DDP联用的药物，可以增强DDP对于黑色素瘤细胞的杀伤作用，并且减少DDP带来的毒副作用，对于黑色素瘤的治疗有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供了TNFSF15蛋白在制备治疗黑色素瘤药物中的用途。

本发明的另一目的是提供了TNFSF15蛋白和顺铂联用在制备治疗黑色素瘤药物中的用途。

本发明采用的技术方案为：

本发明提供了TNFSF15蛋白在制备治疗黑色素瘤药物中的用途。

进一步，在该用途中，将治疗有效量的TNFSF15蛋白与药学上可接受的载体和/或赋形剂混合制成组合物。

本发明还提供了TNFSF15蛋白和顺铂联用在制备治疗黑色素瘤药物中的用途。

进一步，在该用途中，将治疗有效量的TNFSF15蛋白、顺铂与药学上可接受的载体和/或赋形剂混合制成组合物。

优选地，上述用途中，所述的TNFSF15蛋白是由包括如下步骤的纯化方法制备得到的：

(1)表达诱导

a)将表达菌株在含有氨苄抗性的LB平板上划线，在37℃下培养12h；

b)接种环挑取单克隆，在5mL含有氨苄抗性的LB培养基中37℃，220rpm在扩增12h。

c)将扩增所得菌液1:100加入到含有氨苄抗性的LB培养基中，37℃，220rpm条件下使细菌生长至对数生长期，OD值0.6～0.8；

d)将菌液置于4℃静置30min；

e)静置后加入终浓度为50μM的IPTG，16℃，220rpm诱导24h。

(2)菌体裂解

a)4℃，8000rpm离心10min收集菌体；

b)每200mL菌液加25mL裂解液，用630-0561号探头，超声1s，暂停1s，30％的功率冰上超声1min，共2次；

c)再加入5mL 10％Triton X-100，同样的时间间隔和功率冰上超声1min，共2次；

d)将菌液置于冰上静置30min；

e)静置后的菌液4℃，5000rpm离心30min分离获得裂解上清液；

(3)上柱洗脱

a)10倍柱体积ddH₂O冲洗镍柱，5倍柱体积平衡液平衡镍柱；

b)将裂解上清液和Ni-Agarose以体积比为2:1的比例4℃100rpm充分混合2h；

c)将混合好的溶液上柱，4℃收集流出液；

d)流出液全部流出后，加入8倍柱体积的清洗液4℃洗涤杂蛋白；

e)用4倍柱体积的洗脱液4℃洗脱，分别收集前2体积和后2体积的洗脱液。

(4)除盐分装

a)采用以下两种方式中的一种进行除盐：