[发明专利]TNFSF15蛋白在制备治疗黑色素瘤药物中的用途

权利要求书

1.TNFSF15蛋白在制备治疗黑色素瘤药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：在该用途中，将治疗有效量的TNFSF15蛋白与药学上可接受的载体和/或赋形剂混合制成组合物。

3.TNFSF15蛋白和顺铂联用在制备治疗黑色素瘤药物中的用途。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：将治疗有效量的TNFSF15蛋白、顺铂与药学上可接受的载体和/或赋形剂混合制成组合物。

5.根据权利要求1-4任一项所述的用途，其特征在于：所述的TNFSF15蛋白是由包括如下步骤的纯化方法制备得到的：

(1)表达诱导

a)将表达菌株在含有氨苄抗性的LB平板上划线，在37℃下培养12h；

b)接种环挑取单克隆，在5mL含有氨苄抗性的LB培养基中37℃，220rpm在扩增12h。

c)将扩增所得菌液1:100加入到含有氨苄抗性的LB培养基中，37℃，220rpm条件下使细菌生长至对数生长期，OD值0.6～0.8；

d)将菌液置于4℃静置30min；

e)静置后加入终浓度为50μM的IPTG，16℃，220rpm诱导24h。

(2)菌体裂解

a)4℃，8000rpm离心10min收集菌体；

b)每200mL菌液加25mL裂解液，用630-0561号探头，超声1s，暂停1s，30％的功率冰上超声1min，共2次；

c)再加入5mL 10％Triton X-100，同样的时间间隔和功率冰上超声1min，共2次；

d)将菌液置于冰上静置30min；

e)静置后的菌液4℃，5000rpm离心30min分离获得裂解上清液；

(3)上柱洗脱

a)10倍柱体积ddH₂O冲洗镍柱，5倍柱体积平衡液平衡镍柱；

b)将裂解上清液和Ni-Agarose以体积比为2:1的比例4℃100rpm充分混合2h；

c)将混合好的溶液上柱，4℃收集流出液；

d)流出液全部流出后，加入8倍柱体积的清洗液4℃洗涤杂蛋白；

e)用4倍柱体积的洗脱液4℃洗脱，分别收集前2体积和后2体积的洗脱液。

(4)除盐分装

a)采用以下两种方式中的一种进行除盐：

方式一：将收集到的蛋白装入透析袋，蛋白和透析液以1:100的体积比在4℃进行透析，磁子的搅拌速度为200rpm，每次透析3h，透析2次；

方式二：将收集到的蛋白与换盐液以1:1的比例混合，加入换盐柱，4℃，5000rpm离心15min。收集换盐柱上层的溶液，重复上述操作10次。

b)所得蛋白使用0.22μM滤膜过滤除菌，分装，-80℃保存。