[发明专利]一种增强型CIK细胞的培养方法在审
| 申请号： | 201610458954.6 | 申请日： | 2016-06-23 |
| 公开（公告）号： | CN107541489A | 公开（公告）日： | 2018-01-05 |
| 发明（设计）人： | 陈里新;张祥林;朱毅 | 申请（专利权）人： | 斯坦曼生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201321 上海市浦东*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 增强 cik 细胞 培养 方法 | ||
1.一种增强型CIK细胞的培养方法，其步骤包括：
(1)提取并分离单个核细胞；
(2)将单个核细胞用培养液进行诱导培养，并加入细胞因子得到诱导液，诱导液中细胞密度为(2-8)×106个/ml；
(3)每隔3-5天向诱导液中补充培养液和细胞因子，使诱导液中细胞密度维持在(1-4)×106个/ml；
(4)7-21天后收集CIK细胞。
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中按照50-2000U/ml加入细胞因子IFN-γ进行预处理。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于：所述预处理后间隔16-36小时，再向培养液中添加细胞因子CD3mAb、IL-1α和IL-2进行诱导培养，其中CD3mAb的添加量为10-100ng/ml，IL-1α的添加量为50-2000U/ml，IL-2的添加量为100-2000U/ml。
4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于：进行诱导培养时，还添加有细胞因子IL-15，其添加量为100-2000U/ml。
5.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于：所述步骤(3)中，补充的细胞因子为IL-2和IL-15，所述IL-2的添加量为100-2000U/ml，所述IL-15的添加量为100-2000U/ml的IL-15。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的培养方法，其特征在于：所述培养液包括基础培养液和营养物质，其中营养物质由自体血清、人血白蛋白和三磷酸腺苷组成；所述营养物质中，自体血清占培养液的体积百分数为5-10％，人血白蛋白占培养液的体积百分数为5-10％，三磷酸腺苷的浓度为10-1000U/ml；所述基础培养液为GT-T551无血清培养基。
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