[发明专利]一种检测苯丙酮尿症致病基因突变的试剂盒在审
| 申请号： | 201610458294.1 | 申请日： | 2016-06-22 |
| 公开（公告）号： | CN107523608A | 公开（公告）日： | 2017-12-29 |
| 发明（设计）人： | 向天敏;徐沁;梅艳巧;景丹丹 | 申请（专利权）人： | 海门中科基因生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙)31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 226133 江苏省南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 丙酮 致病 基因突变 试剂盒 | ||
1.一种检测苯丙酮尿症致病基因突变的试剂盒，其特征在于，其包括以下成分:PAH基因第1到第13外显子区PCR扩增与测序引物13对、PCR扩增试剂、PCR产物纯化试剂、DNA测序试剂；
所述引物序列为：
2.如权利要求1检测苯丙酮尿症致病基因突变的试剂盒，其特征在于，所述引物序列扩增出的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。
3.如权利要求1检测苯丙酮尿症致病基因突变的试剂盒，其特征在于，通过下述检测苯丙酮尿症致病基因突变，
(1)提取样本的基因组DNA；
(2)PAH基因PCR扩增；
采用权利要求1所述引物序列；每个PCR扩增体系总体积为16μL，包含Taq酶混合液7.5μL、去离子水5.5μL、引物对1μL、基因组DNA 1ul；PCR反应条件为95℃15分钟，进行14个循环的94℃30秒，63℃30秒，72℃45秒；然后进行30个循环的94℃30秒，56℃30秒，72℃45秒，最后进行72℃10分钟；
(3)PCR产物纯化
每个反应体系总体积为5.6μL，包括PCR产物4μL和1.6μL SAP酶混合物，反应条件为37℃45分钟，85℃15分钟；
(4)DNA测序反应
每个反应的体系为总体积10u1，包括PCR酶解产物1μL、BigDye mix 2.2μL和测序引物0.5μL，余量为去离子水；反应条件为96℃1min，进行33个循环的96℃10sec，56℃10sec，60℃2.5min；
反应结束后每管内加入2.5μL EDTA，30μL100％乙醇，震荡4次，避光静置15分钟，3860rpm，25℃离心40min，吸弃上层液体；加入100μL 70％预冷乙醇，盖好，3860rpm，25℃离心15分钟，吸弃上层液体；让酒精在室温挥发干净，加入8μL Hi-Di溶解DNA；在PCR仪上变性：95℃4分钟，冰上静置4分钟，放入测序仪中测序。
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